використаннярозділовий клей
проблеми та загальні проблеми:
1) Розмір між фільтрувальним папером, клеєм і мембраною зазвичай становить фільтрувальний папір > = мембрана > = клей.
2) Між фільтрувальним папером, клеєм і мембраною не повинно бути бульбашок, які можуть спричинити коротке замикання.
3) Через гідрофобність мембрани спочатку її необхідно повністю змочити в метанолі.Крім того, під час подальшої роботи плівка повинна бути весь час у вологому стані (крім методу сухої плівки).
4) Фільтровий папір можна використовувати повторно.У верхньому фільтруючому папері (мембрані) адсорбовано багато перенесених білків, тому верхній і нижній фільтрувальний папір не можна змішувати.Якщо їх неможливо розрізнити, гумовий фільтрувальний папір можна замінити.
5) Час передачі зазвичай становить 1,5 години (1мА-2мА/см2, 10% гель), а час передачі та струм можна регулювати відповідно до молекулярної маси.
1) Під час ламінування плівки, клею та паперових сендвічів працюйте у великій пластині з обертовим буфером для плівки.Після укладання паралельно перенесіть три плівки на пристрій, що обертається.Більше не переміщуйте їх, тому що ймовірність появи бульбашок була повністю виключена завдяки роботі в буфері, тому немає необхідності пускати бульбашки
2) Про час перенесення плівки: 20 В для напівсухого обертання × 30 хв
(б) мокрий спосіб
Ми практично не використовуємо цей метод, тому не будемо його тут представляти.
C визначення ефекту після метастазування
1. Клейове фарбування
Після фарбування кумасси блискучим синім і знебарвлення за допомогою Destain перевірте, чи залишився білок на клеї, щоб відобразити ефект перенесення.
2. Плівка барвника
Існує два типи розчинів барвників: оборотні та незворотні.До оборотних належать Ponceau-s red, fastgreen FC, CPTs тощо. Після фарбування цими барвниками пігмент можна змити, а мембрану можна використовувати для подальшого аналізу.Але незворотні барвники, такі як кумасі блискучий синій, індійська тушь, амідо чорний 10B тощо, а також пофарбована плівка не можна використовувати для подальшого аналізу.
Час публікації: 09 вересня 2022 р