Używaćklej separacyjny
i wspólne problemy:
1) Rozmiar między bibułą filtracyjną, klejem i membraną to ogólnie bibuła filtracyjna> = membrana> = klej.
2) Pomiędzy bibułą filtracyjną, klejem i membraną nie mogą znajdować się pęcherzyki powietrza, które mogłyby spowodować zwarcie.
3) Ze względu na hydrofobowość membrany, membrana musi być najpierw całkowicie zwilżona metanolem.Ponadto podczas kolejnej operacji folia musi być cały czas wilgotna (z wyjątkiem metody suchej powłoki).
4) Papier filtracyjny może być ponownie użyty.Na górnej bibule filtracyjnej (membranie) zaadsorbowanych jest wiele przeniesionych białek, dlatego nie wolno mieszać górnych i dolnych bibuł filtracyjnych.Jeśli nie można ich rozróżnić, można wymienić gumowy filtr papierowy.
5) Czas transferu wynosi na ogół 1,5 godziny (1ma-2ma / cm2, 10% żel), a czas transferu i prąd można dostosować do masy cząsteczkowej.
1) Podczas laminowania kanapek z folii, kleju i papieru należy pracować na dużej płycie z obracającym się buforem folii.Po ułożeniu w stos przenieś trzy równolegle do obracającego się urządzenia do folii.Nie ruszaj ich więcej, ponieważ możliwość powstania bąbelków została całkowicie wyeliminowana poprzez pracę w buforze, więc nie ma potrzeby napędzania bąbelków
2) O czasie transferu filmu: 20 V dla rotacji półsuchej × 30 min
(b) metoda mokra
Zasadniczo nie używamy tej metody, więc nie będziemy jej tutaj przedstawiać.
C identyfikacja efektu po przerzutach
1. Barwienie klejem
Po wybarwieniu błękitem brylantowym Coomassie i odbarwieniu Destain, sprawdź, czy na kleju jest jeszcze białko, aby odzwierciedlić efekt transferu.
2. Folia barwiąca
Istnieją dwa rodzaje roztworów barwników, odwracalne i nieodwracalne.Odwracalne obejmują czerwień pąsową, szybkozieloną FC, CPT itp. Po zabarwieniu tymi barwnikami pigment można wymyć, a membranę można wykorzystać do dalszych analiz.Jednak nieodwracalne barwniki, takie jak brylantowy błękit Coomassie, tusz indyjski, amido Black 10B itp., oraz wybarwiony film nie mogą być użyte do dalszej analizy.
Czas postu: 09-09-2022
