استعمال کریں۔علیحدگی گلو
استعمال اور عام مسائل:
1) فلٹر پیپر، گلو اور جھلی کے درمیان سائز عام طور پر فلٹر پیپر > = جھلی > = گوند ہوتا ہے۔
2) فلٹر پیپر، گوند اور جھلی کے درمیان کوئی بلبل نہیں ہونا چاہیے، جو شارٹ سرکٹ کا سبب بنے۔
3) جھلی کی ہائیڈروفوبیسیٹی کی وجہ سے، جھلی کو پہلے میتھانول میں مکمل طور پر گیلا ہونا چاہیے۔اس کے علاوہ، بعد کے آپریشن میں فلم کو ہر وقت گیلا رکھنا چاہیے (سوائے خشک فلم کے طریقے کے)۔
4) فلٹر پیپر کو دوبارہ استعمال کیا جا سکتا ہے۔اوپری فلٹر پیپر (جھلی) میں بہت سے منتقل شدہ پروٹین جذب ہوتے ہیں، اس لیے اوپری اور نچلے فلٹر پیپرز کو آپس میں نہیں ملایا جانا چاہیے۔اگر ان کی تمیز نہیں کی جا سکتی تو ربڑ کے فلٹر پیپر کو تبدیل کیا جا سکتا ہے۔
5) منتقلی کا وقت عام طور پر 1.5 گھنٹے ہوتا ہے، (1ma-2ma/cm2، 10% جیل)، اور منتقلی کا وقت اور کرنٹ مالیکیولر وزن کے مطابق ایڈجسٹ کیا جا سکتا ہے۔
1) فلم، گوند اور کاغذ کے سینڈوچ کو لیمینیٹ کرتے وقت، گھومنے والی فلم بفر کے ساتھ ایک بڑی پلیٹ میں چلائیں۔اسٹیکنگ کے بعد، تینوں کو متوازی طور پر گھومنے والی فلم ڈیوائس میں منتقل کریں۔انہیں مزید منتقل نہ کریں، کیونکہ بفر میں کام کرنے سے بلبلوں کا امکان مکمل طور پر ختم ہو چکا ہے، اس لیے بلبلوں کو چلانے کی ضرورت نہیں ہے۔
2) فلم کی منتقلی کے وقت کے بارے میں: نیم خشک گردش کے لئے 20 V × 30 منٹ
(b) گیلا طریقہ
ہم بنیادی طور پر یہ طریقہ استعمال نہیں کرتے، اس لیے ہم اسے یہاں متعارف نہیں کرائیں گے۔
C میٹاسٹیسیس کے بعد اثر کی شناخت
1. گلو خضاب
Coomassie شاندار نیلے رنگ کے ساتھ داغ لگانے اور Destain کے ساتھ رنگین ہونے کے بعد، دیکھیں کہ کیا منتقلی کے اثر کو ظاہر کرنے کے لیے گلو پر اب بھی پروٹین موجود ہے۔
2. ڈائی فلم
دو قسم کے ڈائی سلوشنز ہیں، الٹ اور ناقابل واپسی۔الٹ جانے والوں میں پونسیو ریڈ، فاسٹ گرین ایف سی، سی پی ٹی وغیرہ شامل ہیں۔ ان رنگوں سے رنگنے کے بعد، روغن کو دھویا جا سکتا ہے، اور جھلی کو مزید تجزیہ کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے۔لیکن ناقابل واپسی رنگ، جیسے Coomassie brilliant blue، India ink، amido Black 10B، وغیرہ، اور داغ والی فلم کو مزید تجزیہ کے لیے استعمال نہیں کیا جا سکتا۔
پوسٹ ٹائم: ستمبر 09-2022
