Brukseparasjonslim
tiltak og vanlige problemer:
1) Størrelsen mellom filterpapir, lim og membran er generelt filterpapir > = membran > = lim.
2) Det må ikke være bobler mellom filterpapir, lim og membran, som vil forårsake kortslutning.
3) På grunn av membranens hydrofobisitet må membranen først fuktes fullstendig i metanol.I tillegg må filmen holdes våt til enhver tid i den påfølgende operasjonen (unntatt tørrfilmmetoden).
4) Filterpapiret kan gjenbrukes.Det er mange overførte proteiner adsorbert i det øvre filterpapiret (membranen), så det øvre og nedre filterpapiret må ikke blandes.Hvis de ikke kan skilles, kan gummifilterpapiret byttes ut.
5) Overføringstiden er vanligvis 1,5 timer, (1ma-2ma / cm2, 10% gel), og overføringstiden og strømmen kan justeres i henhold til molekylvekten.
1) Ved laminering av film, lim og papirsandwicher, bruk en stor plate med en roterende filmbuffer.Etter stabling, overfør de tre til den roterende filmenheten parallelt.Ikke flytt dem lenger, fordi muligheten for bobler er fullstendig eliminert ved å operere i bufferen, så det er ikke nødvendig å drive bobler
2) Om filmoverføringstid: 20 V for halvtørr rotasjon × 30 min
(b) våt metode
Vi bruker i utgangspunktet ikke denne metoden, så vi vil ikke introdusere den her.
C identifisering av effekt etter metastase
1. Limfarging
Etter farging med Coomassie brilliant blue og avfarging med Destain, se om det fortsatt er protein på limet for å gjenspeile effekten av overføring.
2. Fargefilm
Det finnes to typer fargeløsninger, reversible og irreversible.Reversible inkluderer ponceau-rød, fastgrønn FC, CPT, etc. etter farging med disse fargestoffene kan pigmentet vaskes bort, og membranen kan brukes til videre analyse.Men irreversible fargestoffer, som Coomassie brilliant blue, India-blekk, amido Black 10B, etc., og den fargede filmen kan ikke brukes til videre analyse.
Innleggstid: 09-09-2022
