Koristitiljepilo za odvajanje
situacije i uobičajeni problemi:
1) Veličina između filter papira, ljepila i membrane općenito je filter papir > = membrana > = ljepilo.
2) Između filter papira, ljepila i membrane ne smije biti mjehurića koji bi mogli uzrokovati kratki spoj.
3) Zbog hidrofobnosti membrane, membrana se prvo mora potpuno namočiti u metanolu.Osim toga, folija mora biti vlažna cijelo vrijeme tijekom sljedeće operacije (osim za metodu suhe folije).
4) Filter papir se može ponovno koristiti.Mnogo je prenesenih proteina adsorbiranih u gornjem filter papiru (membrani), pa se gornji i donji filter papir ne smiju miješati.Ako se ne mogu razlikovati, može se zamijeniti gumeni filter papir.
5) Vrijeme prijenosa je općenito 1,5 sati, (1ma-2ma / cm2, 10% gel), a vrijeme prijenosa i struja mogu se prilagoditi prema molekularnoj težini.
1) Kada laminirate film, ljepilo i papirnate sendviče, radite u velikoj ploči s rotirajućim međuspremnikom za film.Nakon slaganja, paralelno prenesite tri na uređaj za rotirajući film.Nemojte ih više pomicati, jer je mogućnost stvaranja mjehurića potpuno eliminirana radom u međuspremniku, pa nema potrebe za tjeranjem mjehurića
2) O vremenu prijenosa filma: 20 V za polusuhu rotaciju × 30 min
(b) mokra metoda
Mi u osnovi ne koristimo ovu metodu, pa je nećemo ovdje predstavljati.
C identifikacija učinka nakon metastaze
1. Bojanje ljepilom
Nakon bojenja s Coomassie brilliant blue i obezbojavanja s Destainom, provjerite ima li još proteina na ljepilu koji odražavaju učinak prijenosa.
2. Film za bojenje
Postoje dvije vrste otopina boja, reverzibilne i ireverzibilne.U reverzibilne spadaju ponceau-s red, fastgreen FC, CPTs itd. nakon bojanja ovim bojama pigment se može isprati, a membrana se može koristiti za daljnju analizu.Ali ireverzibilne boje, kao što su Coomassie brilliant blue, indijska tinta, amido crna 10B, itd., i obojeni film ne mogu se koristiti za daljnju analizu.
Vrijeme objave: 9. rujna 2022
