Naudokiteatskyrimo klijai
problemos ir dažnos problemos:
1) Dydis tarp filtravimo popieriaus, klijų ir membranos paprastai yra filtravimo popierius > = membrana > = klijai.
2) Tarp filtravimo popieriaus, klijų ir membranos neturi būti burbuliukų, kurie sukeltų trumpąjį jungimą.
3) Dėl membranos hidrofobiškumo membrana pirmiausia turi būti visiškai sudrėkinta metanolyje.Be to, tolesnės operacijos metu plėvelė turi būti visą laiką drėgna (išskyrus sausos plėvelės metodą).
4) Filtravimo popierių galima naudoti pakartotinai.Viršutiniame filtravimo popieriuje (membranoje) adsorbuota daug perneštų baltymų, todėl viršutinio ir apatinio filtravimo popierių maišyti negalima.Jei jų negalima atskirti, guminį filtravimo popierių galima pakeisti.
5) Perdavimo laikas paprastai yra 1,5 valandos (1ma-2ma / cm2, 10% gelio), o perdavimo laikas ir srovė gali būti koreguojami pagal molekulinę masę.
1) Laminuodami plėvelę, klijus ir popierinius sumuštinius, dirbkite didelėje lėkštėje su besisukančiu plėvelės buferiu.Sukrovę tris lygiagrečiai perkelkite į besisukantį plėvelės įrenginį.Daugiau jų nejudinkite, nes veikiant buferyje burbulų susidarymo galimybė visiškai pašalinta, todėl nereikia varyti burbulų
2) Apie plėvelės perdavimo laiką: 20 V pusiau sausam sukimui × 30 min
b) šlapias metodas
Iš esmės šio metodo nenaudojame, todėl čia jo nepristatysime.
C poveikio nustatymas po metastazių
1. Dažymas klijais
Nudažę Coomassie briliantiškai mėlyna spalva ir panaikinę spalvą su Destain, pažiūrėkite, ar ant klijų vis dar yra baltymų, atspindinčių pernešimo poveikį.
2. Dažymo plėvelė
Yra dviejų tipų dažų tirpalai – grįžtami ir negrįžtami.Reversiniai yra ponceau-s red, fastgreen FC, CPT ir t.t., nudažius šiais dažais, pigmentą galima nuplauti, o membraną panaudoti tolesnei analizei.Tačiau negrįžtami dažai, tokie kaip Coomassie briliantinė mėlyna, Indijos rašalas, amido Black 10B ir kt., ir nudažyta plėvelė negali būti naudojami tolesnei analizei.
Paskelbimo laikas: 2022-09-09
