Utilizzocolla di separazione
uzioni e problemi comuni:
1) La dimensione tra carta da filtro, colla e membrana è generalmente carta da filtro > = membrana > = colla.
2) Non ci devono essere bolle tra la carta da filtro, la colla e la membrana, che causerebbero un cortocircuito.
3) A causa dell'idrofobicità della membrana, la membrana deve prima essere completamente bagnata in metanolo.Inoltre, il film deve essere mantenuto sempre umido durante l'operazione successiva (ad eccezione del metodo del film secco).
4) La carta da filtro può essere riutilizzata.Ci sono molte proteine trasferite adsorbite nella carta da filtro superiore (membrana), quindi le carte da filtro superiore e inferiore non devono essere mischiate.Se non possono essere distinti, la carta filtro in gomma può essere sostituita.
5) Il tempo di trasferimento è generalmente di 1,5 ore (1ma-2ma/cm2, 10% gel) e il tempo e la corrente di trasferimento possono essere regolati in base al peso molecolare.
1) Quando si laminano film, colla e sandwich di carta, operare in un piatto grande con un tampone di film rotante.Dopo l'impilamento, trasferire i tre in parallelo al dispositivo di pellicola rotante.Non spostarli più, perché la possibilità di bolle è stata completamente eliminata operando nel buffer, quindi non è necessario guidare le bolle
2) Informazioni sul tempo di trasferimento della pellicola: 20 V per rotazione semisecca × 30 min
(b) metodo a umido
Fondamentalmente non usiamo questo metodo, quindi non lo introdurremo qui.
C identificazione dell'effetto dopo la metastasi
1. Tintura colla
Dopo la colorazione con il blu brillante Coomassie e la decolorazione con Destain, vedere se sono ancora presenti proteine sulla colla per riflettere l'effetto del trasferimento.
2. Pellicola colorante
Esistono due tipi di soluzioni coloranti, reversibili e irreversibili.Quelli reversibili includono rosso ponceau, fastgreen FC, CPT, ecc. Dopo la tintura con questi coloranti, il pigmento può essere lavato via e la membrana può essere utilizzata per ulteriori analisi.Ma i coloranti irreversibili, come il blu brillante Coomassie, l'inchiostro di china, il nero amido 10B, ecc., e il film colorato non possono essere utilizzati per ulteriori analisi.
Tempo di pubblicazione: settembre-09-2022
