Úscola de separació
ucions i problemes comuns:
1) La mida entre paper de filtre, cola i membrana és generalment paper de filtre > = membrana > = cola.
2) No hi ha d'haver bombolles entre el paper de filtre, la cola i la membrana, que provocaran curtcircuits.
3) A causa de la hidrofobicitat de la membrana, primer s'ha de mullar completament la membrana en metanol.A més, la pel·lícula s'ha de mantenir humida en tot moment en l'operació posterior (excepte pel mètode de pel·lícula seca).
4) El paper de filtre es pot reutilitzar.Hi ha moltes proteïnes transferides adsorbides al paper de filtre superior (membrana), de manera que els papers de filtre superior i inferior no s'han de barrejar.Si no es poden distingir, es pot substituir el paper de filtre de goma.
5) El temps de transferència és generalment d'1,5 hores, (1ma-2ma / cm2, 10% gel), i el temps de transferència i el corrent es poden ajustar segons el pes molecular.
1) Quan lamineu pel·lícules, cola i entrepans de paper, opereu en una placa gran amb un tampó de pel·lícula giratori.Després d'apilar, transferiu els tres al dispositiu de pel·lícula giratòria en paral·lel.No els moveu més, perquè la possibilitat de bombolles s'ha eliminat completament en operar a l'amortidor, de manera que no cal conduir bombolles.
2) Quant al temps de transferència de la pel·lícula: 20 V per a la rotació semi-sec × 30 min
(b) mètode humit
Bàsicament no utilitzem aquest mètode, així que no el presentarem aquí.
C identificació de l'efecte després de la metàstasi
1. Tintura amb cola
Després de tacar amb Coomassie blau brillant i decolorar amb Destain, comproveu si encara hi ha proteïnes a la cola per reflectir l'efecte de la transferència.
2. Pel·lícula de tintura
Hi ha dos tipus de solucions de colorants, reversibles i irreversibles.Els reversibles inclouen ponceau-s vermell, fastgreen FC, CPT, etc. després de tenyir amb aquests colorants, el pigment es pot rentar i la membrana es pot utilitzar per a una anàlisi posterior.Però els colorants irreversibles, com el blau brillant Coomassie, la tinta índia, l'amido Black 10B, etc., i la pel·lícula tacada no es poden utilitzar per a una anàlisi posterior.
Hora de publicació: Set-09-2022
