Použiteseparačné lepidlo
problémy a bežné problémy:
1) Veľkosť medzi filtračným papierom, lepidlom a membránou je vo všeobecnosti filtračný papier > = membrána > = lepidlo.
2) Medzi filtračným papierom, lepidlom a membránou nesmú byť žiadne bubliny, ktoré spôsobia skrat.
3) Kvôli hydrofóbnosti membrány musí byť membrána najskôr úplne namočená v metanole.Okrem toho musí byť fólia počas nasledujúcej operácie neustále vlhká (okrem metódy suchej fólie).
4) Filtračný papier je možné opätovne použiť.V hornom filtračnom papieri (membráne) je adsorbovaných veľa prenesených proteínov, preto sa horný a dolný filtračný papier nesmie miešať.Ak sa nedajú rozlíšiť, gumový filtračný papier možno vymeniť.
5) Čas prenosu je vo všeobecnosti 1,5 hodiny (1ma-2ma / cm2, 10% gél) a čas prenosu a prúd je možné upraviť podľa molekulovej hmotnosti.
1) Pri laminovaní fólií, lepidiel a papierových sendvičov pracujte vo veľkej platni s rotujúcim fóliovým nárazníkom.Po stohovaní preneste tri paralelne do zariadenia s rotujúcim filmom.Už s nimi nehýbte, pretože možnosť tvorby bublín bola úplne eliminovaná prevádzkou v nárazníku, takže nie je potrebné poháňať bubliny
2) Čas prenosu filmu: 20 V pre polosuchú rotáciu × 30 minút
b) mokrá metóda
Tento spôsob v podstate nepoužívame, preto ho tu nebudeme predstavovať.
C identifikácia účinku po metastáze
1. Farbenie lepidlom
Po zafarbení Coomassie brilantnou modrou a odfarbení pomocou Destain skontrolujte, či je na lepidle ešte proteín, ktorý odráža efekt prenosu.
2. Farbiaci film
Existujú dva druhy roztokov farbív, reverzibilné a nevratné.Medzi reverzibilné patria ponceau-s red, fastgreen FC, CPTs atď. Po vyfarbení týmito farbivami je možné pigment zmyť a membránu použiť na ďalšiu analýzu.Ale ireverzibilné farbivá, ako je Coomassie brilantná modrá, atrament India, amido Black 10B atď., a zafarbený film nemožno použiť na ďalšiu analýzu.
Čas odoslania: september 09-2022
