Koristiljepilo za razdvajanje
veze i uobičajeni problemi:
1) Veličina između filter papira, ljepila i membrane je općenito filter papir > = membrana > = ljepilo.
2) Između filter papira, ljepila i membrane ne smije biti mjehurića koji će uzrokovati kratki spoj.
3) Zbog hidrofobnosti membrane, membrana se prvo mora potpuno navlažiti u metanolu.Osim toga, folija mora biti stalno vlažna u narednoj operaciji (osim metode suhog filma).
4) Filter papir se može ponovo koristiti.Mnogo je prenesenih proteina adsorbiranih u gornjem filter papiru (membrani), tako da se gornji i donji filter papir ne smiju miješati.Ako se ne mogu razlikovati, gumeni filter papir se može zamijeniti.
5) Vrijeme prijenosa je općenito 1,5 sati (1ma-2ma / cm2, 10% gela), a vrijeme prijenosa i struja mogu se podesiti prema molekularnoj težini.
1) Kada laminirate film, ljepilo i papirne sendviče, radite u velikoj ploči s rotirajućim filmskim puferom.Nakon slaganja, prebacite tri paralelno na rotirajući filmski uređaj.Nemojte ih više pomicati, jer je mogućnost stvaranja mjehurića potpuno eliminisana radom u baferu, tako da nema potrebe za tjeranjem mjehurića
2) O vremenu prijenosa filma: 20 V za polusuhu rotaciju × 30 min
(b) mokri metod
Mi u osnovi ne koristimo ovu metodu, pa je nećemo ovdje predstavljati.
C identifikacija efekta nakon metastaze
1. Bojenje ljepilom
Nakon bojenja sa Coomassie brilliant blue i dekoloracije sa Destainom, pogledajte ima li još proteina na ljepilu kako bi se odrazio učinak prijenosa.
2. Film za bojenje
Postoje dvije vrste otopina boja, reverzibilne i ireverzibilne.Reverzibilne uključuju ponceau-s red, fastgreen FC, CPTs, itd. Nakon bojenja ovim bojama pigment se može isprati, a membrana se može koristiti za dalju analizu.Ali nepovratne boje, kao što su Coomassie brilliant blue, Indijska tinta, amido Black 10B, itd., i obojeni film ne mogu se koristiti za dalju analizu.
Vrijeme objave: Sep-09-2022
