Usarcola de separação
ções e problemas comuns:
1) O tamanho entre papel de filtro, cola e membrana é geralmente papel de filtro > = membrana > = cola.
2) Não deve haver bolhas entre o papel filtro, a cola e a membrana, o que pode causar curto-circuito.
3) Devido à hidrofobicidade da membrana, a membrana deve primeiro ser completamente molhada em metanol.Além disso, o filme deve ser mantido sempre úmido na operação subsequente (exceto no método de filme seco).
4) O papel de filtro pode ser reutilizado.Existem muitas proteínas transferidas adsorvidas no papel de filtro superior (membrana), portanto, os papéis de filtro superior e inferior não devem ser misturados.Se eles não puderem ser distinguidos, o papel de filtro de borracha pode ser substituído.
5) O tempo de transferência é geralmente de 1,5 horas (1ma-2ma / cm2, 10% de gel), e o tempo de transferência e a corrente podem ser ajustados de acordo com o peso molecular.
1) Ao laminar filme, cola e sanduíches de papel, opere em uma placa grande com um buffer de filme rotativo.Após o empilhamento, transfira os três para o dispositivo de filme rotativo em paralelo.Não os mova mais, porque a possibilidade de bolhas foi completamente eliminada ao operar no buffer, portanto não há necessidade de conduzir bolhas
2) Sobre o tempo de transferência do filme: 20 V para rotação semi-seca × 30min
(b) método úmido
Basicamente, não usamos esse método, portanto não o apresentaremos aqui.
C identificação do efeito após a metástase
1. Tingimento com cola
Depois de tingir com Coomassie brilhante azul e descolorir com Destain, veja se ainda há proteína na cola para refletir o efeito da transferência.
2. Película de corante
Existem dois tipos de soluções de corantes, reversíveis e irreversíveis.Os reversíveis incluem vermelho ponceau-s, fastgreen FC, CPTs, etc. após o tingimento com esses corantes, o pigmento pode ser lavado e a membrana pode ser usada para análise posterior.Mas corantes irreversíveis, como Coomassie brilhante azul, tinta nanquim, amido Black 10B, etc., e o filme manchado não podem ser usados para análise posterior.
Horário da postagem: 09 de setembro de 2022
