BenotztTrennung gekollt
Ufuerderungen a gemeinsame Probleemer:
1) D'Gréisst tëscht Filterpabeier, Klebstoff a Membran ass allgemeng Filterpabeier > = Membran > = Klebstoff.
2) Et däerf keng Blasen tëscht Filterpabeier, Klebstoff a Membran sinn, wat de Kuerzschluss verursaacht.
3) Wéinst der Hydrophobitéit vun der Membran muss d'Membran als éischt komplett a Methanol befeucht ginn.Zousätzlech muss de Film an der nächster Operatioun zu all Moment naass gehal ginn (ausser d'Trocknfilmmethod).
4) De Filterpabeier kann nei benotzt ginn.Et gi vill transferéiert Proteinen, déi am ieweschte Filterpabeier (Membran) adsorbéiert sinn, sou datt déi iewescht an déi ënnescht Filterpabeier net gemëscht ginn.Wa se net z'ënnerscheeden, kann de Gummifilterpabeier ersat ginn.
5) D'Transferzäit ass allgemeng 1,5 Stonnen, (1ma-2ma / cm2, 10% Gel), an d'Transferzäit an d'Stroum kënnen no dem Molekulargewiicht ugepasst ginn.
1) Wann laminéiert Film, gekollt a Pabeier Sandwichen, Bedreiwen an enger grousser Plack mat engem rotativ Film Puffer.Nom Stacking, Transfert déi dräi op d'rotéierend Film Apparat parallel.Beweegt se net méi, well d'Méiglechkeet vu Bubbles komplett eliminéiert gouf andeems Dir am Puffer funktionnéiert, sou datt et net néideg ass Bubbles ze fueren
2) Iwwer Film Transfert Zäit: 20 V fir semi dréchen Rotatioun × 30min
(b) naass Method
Mir benotzen dës Method am Fong net, also wäerte mir se net hei aféieren.
C Identifikatioun vum Effekt no Metastasen
1. Kliewefolie
Nodeems Dir mat Coomassie brillant Blo gefärzt hutt an mat Destain entfernt hutt, kuckt ob et nach ëmmer Protein um Klebstoff ass fir den Effekt vum Transfert ze reflektéieren.
2. Dye Film
Et ginn zwou Aarte vu Faarfléisungen, reversibel an irreversibel.Reversibel sinn och ponceau-s rout, fastgreen FC, CPTs, etc.. No der Fierwerei mat dëse Faarfstoffer, kann de Pigment gewäsch ginn, an d'Membran kann fir weider Analyse benotzt ginn.Awer irreversibel Faarfstoffer, wéi Coomassie brillant blo, Indien Tënt, Amido Black 10B, etc., an de gefierfte Film kann net fir weider Analyse benotzt ginn.
Post Zäit: Sep-09-2022
