Utilisercolle de séparation
utions et problèmes courants :
1) La taille entre le papier filtre, la colle et la membrane est généralement du papier filtre > = membrane > = colle.
2) Il ne doit pas y avoir de bulles entre le papier filtre, la colle et la membrane, ce qui provoquerait un court-circuit.
3) En raison de l'hydrophobicité de la membrane, la membrane doit d'abord être complètement mouillée dans du méthanol.De plus, le film doit être maintenu humide en permanence lors de l'opération suivante (sauf pour la méthode du film sec).
4) Le papier filtre peut être réutilisé.Il existe de nombreuses protéines transférées adsorbées dans le papier filtre supérieur (membrane), de sorte que les papiers filtres supérieur et inférieur ne doivent pas être mélangés.S'ils ne peuvent pas être distingués, le papier filtre en caoutchouc peut être remplacé.
5) Le temps de transfert est généralement de 1,5 heures, (1ma-2ma/cm2, gel à 10%), et le temps de transfert et le courant peuvent être ajustés en fonction du poids moléculaire.
1) Lors du laminage de films, de colle et de sandwichs en papier, opérez dans une grande plaque avec un tampon de film rotatif.Après l'empilement, transférez les trois vers le dispositif de film rotatif en parallèle.Ne les déplacez plus, car la possibilité de bulles a été complètement éliminée en opérant dans le tampon, il n'est donc pas nécessaire de conduire des bulles
2) À propos du temps de transfert du film : 20 V pour une rotation semi-sèche × 30 min
(b) méthode humide
Nous n'utilisons pas cette méthode, nous ne la présenterons donc pas ici.
C identification de l'effet après métastase
1. Teinture à la colle
Après coloration au bleu brillant de Coomassie et décoloration au Destain, voir s'il reste des protéines sur la colle pour refléter l'effet de transfert.
2. Film de teinture
Il existe deux types de solutions de colorants, réversibles et irréversibles.Les réversibles comprennent le ponceau-s red, le fastgreen FC, les CPT, etc. après teinture avec ces colorants, le pigment peut être lavé et la membrane peut être utilisée pour une analyse plus approfondie.Mais les colorants irréversibles, tels que le bleu brillant de Coomassie, l'encre de Chine, l'amido Black 10B, etc., et le film coloré ne peuvent pas être utilisés pour une analyse plus approfondie.
Heure de publication : 09 septembre 2022
