Använda sig avseparationslim
åtgärder och vanliga problem:
1) Storleken mellan filterpapper, lim och membran är i allmänhet filterpapper > = membran > = lim.
2) Det får inte finnas några bubblor mellan filterpapper, lim och membran, vilket kommer att orsaka kortslutning.
3) På grund av membranets hydrofobicitet måste membranet först vätas helt i metanol.Dessutom måste filmen hållas våt hela tiden i den efterföljande operationen (förutom torrfilmsmetoden).
4) Filterpapperet kan återanvändas.Det finns många överförda proteiner adsorberade i det övre filterpapperet (membranet), så det övre och nedre filterpapperet får inte blandas.Om de inte går att särskilja kan gummifilterpapperet bytas ut.
5) Överföringstiden är i allmänhet 1,5 timmar (1ma-2ma / cm2, 10 % gel), och överföringstiden och strömmen kan justeras efter molekylvikten.
1) När du laminerar film, lim och papper smörgåsar, arbeta i en stor platta med en roterande filmbuffert.Efter stapling överför du de tre parallellt till den roterande filmanordningen.Flytta dem inte längre, eftersom möjligheten för bubblor har eliminerats helt genom att arbeta i bufferten, så det finns inget behov av att driva bubblor
2) Om filmöverföringstid: 20 V för halvtorr rotation × 30 min
b) våt metod
Vi använder i princip inte denna metod, så vi kommer inte att introducera den här.
C identifiering av effekt efter metastasering
1. Limfärgning
Efter färgning med Coomassie briljantblått och avfärgning med Destain, se om det fortfarande finns protein på limmet för att återspegla effekten av överföring.
2. Färgfilm
Det finns två typer av färglösningar, reversibla och irreversibla.Reversibla sådana inkluderar ponceau-rött, fastgreen FC, CPT, etc. efter färgning med dessa färgämnen kan pigmentet tvättas bort och membranet kan användas för vidare analys.Men irreversibla färgämnen, såsom Coomassie brilliant blue, India ink, amido Black 10B, etc., och den färgade filmen kan inte användas för ytterligare analys.
Posttid: 2022-09-09
