ಬೇರ್ಪಡಿಸುವ ಅಂಟು ಹೇಗೆ ಬಳಸುವುದು?- ಭಾಗ 1

ಬೇರ್ಪಡಿಸುವ ಅಂಟು ಹೇಗೆ ಬಳಸುವುದು?

ವೆಸ್ಟರ್ನ್ ಬ್ಲಾಟ್ ಮೆಂಬರೇನ್ ವರ್ಗಾವಣೆ

ಪ್ರಸ್ತುತದ ಕ್ರಿಯೆಯ ಅಡಿಯಲ್ಲಿ, ಪ್ರೋಟೀನ್ ಅನ್ನು ಜೆಲ್ನಿಂದ ಘನ ವಾಹಕಕ್ಕೆ (ಮೆಂಬರೇನ್) ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

ಮೆಂಬರೇನ್ ಆಯ್ಕೆ: ಮುದ್ರಣದಲ್ಲಿ ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಬಳಸುವ ಘನ-ಹಂತದ ವಸ್ತುಗಳೆಂದರೆ NC ಮೆಂಬರೇನ್, DBM, DDT, ನೈಲಾನ್ ಮೆಂಬರೇನ್, PVDF, ಇತ್ಯಾದಿ. ನಾವು PVDF (ಪಾಲಿವಿನೈಲಿಡೀನ್ ಫ್ಲೋರೈಡ್) ಅನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡುತ್ತೇವೆ, ಇದು ಉತ್ತಮ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವಿಕೆ, ದೈಹಿಕ ಸಾಮರ್ಥ್ಯ ಮತ್ತು ಉತ್ತಮ ರಾಸಾಯನಿಕ ಹೊಂದಾಣಿಕೆಯನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ.ಎರಡು ವಿಶೇಷಣಗಳಿವೆ: immobilon-p (0.45um) ಮತ್ತು immobilon PSQ (MW <20kDa ಗೆ 0.2um).

ಅರೆ ಒಣ ವಿಧಾನ

ಅಂದರೆ, ವರ್ಗಾವಣೆ ಬಫರ್ನೊಂದಿಗೆ ಫಿಲ್ಟರ್ ಪೇಪರ್ ನಡುವೆ ಜೆಲ್ ಇಂಟರ್ಲೇಯರ್ ಸಂಯೋಜನೆಯನ್ನು ಇರಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮತ್ತು ವರ್ಗಾವಣೆ ಪರಿಣಾಮವನ್ನು ಸಾಧಿಸಲು ಫಿಲ್ಟರ್ ಪೇಪರ್ನಲ್ಲಿ ಹೀರಿಕೊಳ್ಳುವ ಬಫರ್ ಮೂಲಕ ಪ್ರವಾಹವನ್ನು ನಡೆಸಲಾಗುತ್ತದೆ.ಪ್ರಸ್ತುತವು ಫಿಲ್ಮ್ ಅಂಟು ಮೇಲೆ ನೇರವಾಗಿ ಕಾರ್ಯನಿರ್ವಹಿಸುವುದರಿಂದ, ವರ್ಗಾವಣೆಯ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳು ತುಲನಾತ್ಮಕವಾಗಿ ಕಠಿಣವಾಗಿರುತ್ತವೆ, ಆದರೆ ವರ್ಗಾವಣೆ ಸಮಯವು ಚಿಕ್ಕದಾಗಿದೆ ಮತ್ತು ದಕ್ಷತೆಯು ಹೆಚ್ಚಾಗಿರುತ್ತದೆ.

(1) ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗಳ ಆಯ್ಕೆ

ಪ್ರಸ್ತುತವು 1ma-2ma / cm2 ಆಗಿದೆ, ಮತ್ತು ನಾವು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 100mA / ಮೆಂಬರೇನ್ ಅನ್ನು ಬಳಸುತ್ತೇವೆ.ಟಾರ್ಗೆಟ್ ಪ್ರೊಟೀನ್ ಅಣುವಿನ ಗಾತ್ರ ಮತ್ತು ಜೆಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ವರ್ಗಾವಣೆ ಸಮಯವನ್ನು ಆಯ್ಕೆ ಮಾಡಬಹುದು ಮತ್ತು ನೈಜ ಪರಿಸ್ಥಿತಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಸೂಕ್ತವಾಗಿ ಸರಿಹೊಂದಿಸಬಹುದು.

ಟಾರ್ಗೆಟ್ ಪ್ರೋಟೀನ್ ಆಣ್ವಿಕ ಗಾತ್ರ (kDa), ಜೆಲ್ ಸಾಂದ್ರತೆ ಮತ್ತು ವರ್ಗಾವಣೆ ಸಮಯ

80---140 8% 1.5-2.0

25---80 10% 1.5

15—40 12% 0.75

<20 15% 0.5

(2) ಪ್ರಾಯೋಗಿಕ ಕಾರ್ಯಾಚರಣೆ

(1) ಫಿಲ್ಟರ್ ಪೇಪರ್ ಮತ್ತು ಮೆಂಬರೇನ್ ತಯಾರಿಕೆ (ಇಲೆಕ್ಟ್ರೋಫೋರೆಸಿಸ್ಗೆ 20 ನಿಮಿಷಗಳ ಮೊದಲು ತಯಾರಿಯನ್ನು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಬೇಕು).

ಎ. ಸಾಕಷ್ಟು ವರ್ಗಾವಣೆ ಬಫರ್‌ಗಳಿವೆಯೇ ಎಂದು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ, ಅದನ್ನು ತಕ್ಷಣವೇ ಸಿದ್ಧಪಡಿಸಲಾಗಿಲ್ಲ.

ಬಿ. ಫಿಲ್ಟರ್ ಪೇಪರ್ ಮತ್ತು ಸರಿಯಾದ ಗಾತ್ರದ ಮೆಂಬರೇನ್ ಇದೆಯೇ ಎಂದು ಪರಿಶೀಲಿಸಿ.

C. ಮೆಥನಾಲ್ನಲ್ಲಿ ಸುಮಾರು 1-2 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಪೊರೆಯನ್ನು ಮುಳುಗಿಸಿ.ತದನಂತರ ವರ್ಗಾವಣೆ ಬಫರ್‌ಗೆ ವರ್ಗಾಯಿಸಲಾಗಿದೆ.

D. ಅನುಕ್ರಮವಾಗಿ ವರ್ಗಾವಣೆ ಬಫರ್‌ನಲ್ಲಿ ಸೂಕ್ತವಾದ ಅಂಟಿಕೊಳ್ಳುವ ಫಿಲ್ಟರ್ ಪೇಪರ್ ಮತ್ತು ಮೆಂಬರೇನ್ ಫಿಲ್ಟರ್ ಪೇಪರ್ ಅನ್ನು ನೆನೆಸಿ.

ವರ್ಗಾವಣೆ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ನಮೂದಿಸುವಾಗ PDVF ಮೆಂಬರೇನ್ ಎಷ್ಟು ಸಮಯದವರೆಗೆ ಮೆಥನಾಲ್ನಲ್ಲಿ ನೆನೆಸಬೇಕು?

PVDF ಹೈಡ್ರೋಫೋಬಿಕ್ ಆಗಿದೆ, ಮತ್ತು ವರ್ಗಾವಣೆ ಬಫರ್ನಲ್ಲಿ ನೆನೆಸುವುದು ಕಷ್ಟ.ಮೆಥನಾಲ್ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯ ನಂತರ, ಅದನ್ನು ನೆನೆಸಲು ಸುಲಭವಾಗುತ್ತದೆ.PVDF ನ ಪೂರ್ವಭಾವಿ ಚಿಕಿತ್ಸೆಯು ಮೆಥನಾಲ್ನೊಂದಿಗೆ ಅದನ್ನು ನೆನೆಸಿ ಮತ್ತು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವುದು, ಮತ್ತು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ನೆನೆಸಿದ ನಂತರ ಅದನ್ನು ಬಟ್ಟಿ ಇಳಿಸಿದ ನೀರಿನಿಂದ ಎರಡು ಬಾರಿ ತೊಳೆಯುವುದು.ಮೆಥನಾಲ್ ಗುಳ್ಳೆಗಳನ್ನು ಬಳಸುವ ಉದ್ದೇಶವು PVDF ಮೆಂಬರೇನ್‌ನಲ್ಲಿ ಧನಾತ್ಮಕ ಆವೇಶದ ಗುಂಪುಗಳನ್ನು ಸಕ್ರಿಯಗೊಳಿಸುವುದು ಮತ್ತು ಋಣಾತ್ಮಕ ಆವೇಶದ ಪ್ರೋಟೀನ್‌ಗಳೊಂದಿಗೆ ಬಂಧಿಸುವುದನ್ನು ಸುಲಭಗೊಳಿಸುವುದು.

ಜನರು ಇದನ್ನು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ 5-20 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ಬಳಸುತ್ತಾರೆ.ಅಂಟು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುವಾಗ ಅದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ನೆನೆಸಬಹುದು, ಮತ್ತು ಇದು ಸುಮಾರು 5 ನಿಮಿಷಗಳನ್ನು ತೆಗೆದುಕೊಳ್ಳುತ್ತದೆ ಎಂದು ಅಂದಾಜಿಸಲಾಗಿದೆ.ಪರಿಣಾಮ ಕೆಟ್ಟದ್ದಲ್ಲ.ಹಿಂದೆ, ಕೆಲವು ವೆಬ್‌ಫ್ರೆಂಡ್‌ಗಳು ಸಂಸ್ಕರಣೆಯ ಸಮಯವು ಹೆಚ್ಚು ಮುಖ್ಯವಲ್ಲ, ಆದರೆ ಮುಖ್ಯವಾದುದು ಚಿತ್ರದ ಗುಣಮಟ್ಟ ಎಂದು ಪೋಸ್ಟ್ ಮಾಡಿತು.ಅದು ಸತ್ಯ.ಪೊರೆಯು ಸಂಪೂರ್ಣವಾಗಿ ನೆನೆಸಿದವರೆಗೆ, ಅದು ಸರಿಯಾಗಿರಬೇಕು.

ಹೈಬಾಂಡ್‌ನ PVDF ವಿವರಣೆಯು ಈ ಕೆಳಗಿನಂತೆ ಓದುತ್ತದೆ: "ಮೆಂಬರೇನ್ ಅನ್ನು 100% ಮೆಟಾನಾಲ್ (10 ಸೆಕೆಂಡುಗಳು) ನಲ್ಲಿ ಮೊದಲೇ ತೇವಗೊಳಿಸಿ".ಕನಿಷ್ಠ 10 ಸೆಕೆಂಡುಗಳ ಕಾಲ ನೆನೆಸುವುದು ಸರಿ ಎಂದು ನನ್ನ ತಿಳುವಳಿಕೆ.ವಾಸ್ತವವಾಗಿ, 10 ಸೆಕೆಂಡುಗಳು ಅಥವಾ 10 ನಿಮಿಷಗಳ ಕಾಲ ನೆನೆಸುವುದು ಸರಿ.

(2) ವರ್ಗಾವಣೆ

ಎ. ಎಲೆಕ್ಟ್ರಿಕ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್‌ಫರ್ ಇನ್‌ಸ್ಟ್ರುಮೆಂಟ್‌ನಲ್ಲಿ ಕೆಳಗಿನ ಫಿಲ್ಟರ್ ಪೇಪರ್ ಅನ್ನು ಹಾಕಿ.ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಮೂರು ಪದರಗಳನ್ನು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

B. ಪೊರೆಯ ವಿರುದ್ಧ ಫಿಲ್ಟರ್ ಪೇಪರ್ ಮೇಲೆ ಪೊರೆಯನ್ನು ಹಾಕಿ, ಪೊರೆಯ ಮತ್ತು ಫಿಲ್ಟರ್ ಪೇಪರ್ ನಡುವೆ ಗುಳ್ಳೆಗಳು ಇರದಂತೆ ಗಮನ ಕೊಡಿ ಮತ್ತು ಪೊರೆಯನ್ನು ತೇವವಾಗಿಡಲು ಮೆಂಬರೇನ್ ಮೇಲೆ ಸ್ವಲ್ಪ ವರ್ಗಾವಣೆ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಸುರಿಯಿರಿ.

C. ಅಂಟು ಸಿಪ್ಪೆ ತೆಗೆಯಿರಿ, ಸ್ಟಾಕ್ ಜೆಲ್ ಅನ್ನು ತೆಗೆದುಹಾಕಿ ಮತ್ತು ಅದನ್ನು ಎಚ್ಚರಿಕೆಯಿಂದ ಚಿತ್ರದ ಮೇಲೆ ಸರಿಸಿ.

D. ಚಿತ್ರದ ಮೇಲಿನ ಎಡ ಮೂಲೆಯನ್ನು ಕತ್ತರಿಸಿ ಮತ್ತು ಪೆನ್ಸಿಲ್ನೊಂದಿಗೆ ಚಿತ್ರದ ಮೇಲೆ ಅಂಟು ಸ್ಥಾನವನ್ನು ಗುರುತಿಸಿ.

ಇ. ಅಂಟು ಮೇಲೆ ಅಂಟು ವಿರುದ್ಧ ಫಿಲ್ಟರ್ ಕಾಗದದ ತುಂಡನ್ನು ಕವರ್ ಮಾಡಿ.ಕೆಲವು ವರ್ಗಾವಣೆ ಬಫರ್ ಅನ್ನು ಸುರಿಯಿರಿ ಮತ್ತು ಫಿಲ್ಟರ್ ಪೇಪರ್ನ ಎರಡು ತುಂಡುಗಳನ್ನು ಹಾಕಿ.

ಎಫ್. ವಿದ್ಯುತ್ ವರ್ಗಾವಣೆ ಉಪಕರಣವನ್ನು ಸ್ಥಾಪಿಸಿ ಮತ್ತು ಅಗತ್ಯಗಳಿಗೆ ಅನುಗುಣವಾಗಿ ಅಗತ್ಯವಿರುವ ಪ್ರಸ್ತುತ ಮತ್ತು ಸಮಯವನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡಿ.

G. ವರ್ಗಾವಣೆ ಪ್ರಕ್ರಿಯೆಯಲ್ಲಿ, ವೋಲ್ಟೇಜ್ ಬದಲಾವಣೆಯನ್ನು ಯಾವುದೇ ಸಮಯದಲ್ಲಿ ಗಮನಿಸಬೇಕು ಮತ್ತು ಯಾವುದೇ ಅಸಹಜತೆಯನ್ನು ಸಮಯಕ್ಕೆ ಸರಿಹೊಂದಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.