Kedu ka esi eji gluu nkewa?- akụkụ 1

Kedu ka esi eji gluu nkewa?

Mbufe akpụkpọ ahụ Western blot

N'okpuru ọrụ nke ugbu a, a na-ebufe protein ahụ site na gel na onye na-ebu siri ike (membrane).

Nhọrọ nke membrane: ihe ndị a na-ejikarị siri ike na-edepụta ihe na-agụnye akpụkpọ anụ NC, DBM, DDT, nylon membrane, PVDF, wdg. Anyị na-ahọrọ PVDF (polyvinylidene fluoride), nke nwere mgbasa ozi protein ka mma, ike anụ ahụ na ndakọrịta kemịkalụ ka mma.Enwere nkọwa abụọ: immobilon-p (0.45um) na immobilon PSQ (0.2um maka MW <20kDa).

Usoro ọkara akọrọ

Nke ahụ bụ, a na-etinye nchikota gel interlayer n'etiti akwụkwọ nzacha na ihe nkwụnye mbufe, na nke ugbu a na-eduzi site na ihe nkwụnye na-agbanye na akwụkwọ nzacha iji nweta mmetụta mbufe.N'ihi na ugbu a na-eme ihe ozugbo na gluu ihe nkiri ahụ, ọnọdụ nnyefe dị oke njọ, mana oge mbufe dị mkpụmkpụ na arụmọrụ dị elu.

(1) nhọrọ nke ọnọdụ nnwale

Ihe dị ugbu a bụ 1ma-2ma / cm2, anyị na-ejikarị 100mA / akpụkpọ ahụ.Enwere ike ịhọrọ oge mbufe dịka nha nke molecule protein ezubere iche na mkpokọta gel, enwere ike ịhazi ya nke ọma dịka ọnọdụ dị adị.

Nha protein molekul (kDa), itinye uche gel na oge mbufe

80---140 8% 1.5-2.0

25---80 10% 1.5

15-40 12% 0.75

<20 15% 0.5

(2) ọrụ nnwale

(1) Nkwadebe akwụkwọ nzacha na akpụkpọ anụ (nkwadebe ga-amalite nkeji 20 tupu electrophoresis).

A. Lelee ma enwere ihe nchekwa mbufe zuru oke, nke anaghị akwado ya ozugbo.

B. Lelee ma enwere akwụkwọ nzacha na akpụkpọ ahụ nke nha kwesịrị ekwesị.

C. Tinye akpụkpọ ahụ n'ime methanol ihe dịka nkeji 1-2.Ma bufee ya na nchekwa mbufe.

D. Tinye akwụkwọ nleba anya kwesịrị ekwesị yana akwụkwọ nzacha akpụkpọ anụ n'ime ihe nchekwa mbufe n'otu n'otu.

Ogologo oge ole ka akpụkpọ ahụ PDVF ga-adaba na methanol mgbe ị na-abanye na nchekwa mbufe?

PVDF bụ hydrophobic, ọ na-esikwa ike ịbanye n'ime ihe nchekwa mbufe.Mgbe ọgwụgwọ methanol gasịrị, ọ dị mfe ịmịnye.Usoro ọgwụgwọ PVDF bụ iji methanol mee ka ọ rụọ ọrụ, wee saa ya ugboro abụọ na mmiri distilled mgbe ịsachara nke ọma.Ebumnuche nke iji methanol bubbles bụ iji mee ka ndị otu ebubo nke ọma na akpụkpọ ahụ PVDF wee mee ka ọ dị mfe ijikọta protein ndị ebubo na-adịghị mma.

Ndị mmadụ na-ejikarị ya 5-20 nkeji.Enwere ike ịmịnye ya n'otu oge ahụ ka ị na-ewere gluu, a na-echekwa na ọ ga-ewe ihe dị ka nkeji 5.Mmetụta adịghị njọ.N'oge gara aga, ụfọdụ ndị enyi weebụ biputere na oge nhazi adịghị mkpa, mana isi ihe bụ àgwà nke ihe nkiri ahụ.Nke ahụ bụ eziokwu.Ọ bụrụhaala na akpụkpọ ahụ na-agbanye kpamkpam, ọ kwesịrị ịdị mma.

Nkọwapụta Hybond's PVDF na-agụ dị ka ndị a: "tufuo akpụkpọ ahụ na 100% metanol (sekọnd 10)".Nghọta m bụ na ọ dị mma imikpu opekata mpe 10 sekọnd.N'ezie, ọ dị mma imikpu maka sekọnd iri ma ọ bụ nkeji iri.

(2) Nyefee

A. Debe akwụkwọ nzacha ala n'elu ngwá ọrụ nnyefe ọkụ eletrik.N'ozuzu, a na-eji akwa atọ eme ihe.

B. Debe akpụkpọ ahụ n'elu mpempe akwụkwọ nzacha megide akpụkpọ ahụ, ṅaa ntị ka ị ghara inwe afụ n'etiti akpụkpọ ahụ na akwụkwọ nzacha, ma wụsa ihe nkwụnye mbufe n'ime akpụkpọ ahụ iji mee ka akpụkpọ ahụ dị mmiri.

C. Kpochapụ gluu, wepụ gel stack wee jiri nlezianya bugharịa ya na fim ahụ.

D. Beepụ n'akụkụ aka ekpe elu nke ihe nkiri ahụ ma jiri pensụl mee ihe n'ọnọdụ gluu na fim ahụ.

E. Na-ekpuchi mpempe akwụkwọ nzacha megide gluu na gluu.Wunye ihe ntanye mbufe ma dina mpempe akwụkwọ nzacha abụọ.

F. Wụnye ngwa nnyefe ọkụ eletrik wee họrọ ihe achọrọ ugbu a na oge dịka mkpa dị.

G. N'oge usoro nnyefe, a ga-ahụ mgbanwe voltaji n'oge ọ bụla, a ga-edozikwa ihe ọ bụla na-adịghị mma na oge.