వేరు గ్లూ ఎలా ఉపయోగించాలి?
వెస్ట్రన్ బ్లాట్ మెమ్బ్రేన్ బదిలీ
ప్రస్తుత చర్యలో, ప్రోటీన్ జెల్ నుండి ఘన క్యారియర్ (మెమ్బ్రేన్) కు బదిలీ చేయబడుతుంది.
మెంబ్రేన్ ఎంపిక: ముద్రణలో సాధారణంగా ఉపయోగించే ఘన-దశ పదార్థాలు NC పొర, DBM, DDT, నైలాన్ మెంబ్రేన్, PVDF మొదలైనవి. మేము PVDF (పాలీవినైలిడిన్ ఫ్లోరైడ్)ని ఎంచుకుంటాము, ఇది మెరుగైన ప్రోటీన్ శోషణ, శారీరక బలం మరియు మెరుగైన రసాయన అనుకూలత.రెండు వివరణలు ఉన్నాయి: immobilon-p (0.45um) మరియు immobilon PSQ (MW <20kDa కోసం 0.2um).
సెమీ డ్రై పద్ధతి
అంటే, బదిలీ బఫర్‌తో ఫిల్టర్ పేపర్ మధ్య జెల్ ఇంటర్‌లేయర్ కలయిక ఉంచబడుతుంది మరియు బదిలీ ప్రభావాన్ని సాధించడానికి ఫిల్టర్ పేపర్‌పై శోషించబడిన బఫర్ ద్వారా కరెంట్ నిర్వహించబడుతుంది.కరెంట్ ఫిల్మ్ జిగురుపై నేరుగా పనిచేస్తుంది కాబట్టి, బదిలీ పరిస్థితులు సాపేక్షంగా కఠినంగా ఉంటాయి, కానీ బదిలీ సమయం తక్కువగా ఉంటుంది మరియు సామర్థ్యం ఎక్కువగా ఉంటుంది.
(1) ప్రయోగాత్మక పరిస్థితుల ఎంపిక
ప్రస్తుత 1ma-2ma / cm2, మరియు మేము సాధారణంగా 100mA / పొరను ఉపయోగిస్తాము.లక్ష్య ప్రోటీన్ అణువు యొక్క పరిమాణం మరియు జెల్ ఏకాగ్రత ప్రకారం బదిలీ సమయాన్ని ఎంచుకోవచ్చు మరియు వాస్తవ పరిస్థితికి అనుగుణంగా తగిన విధంగా సర్దుబాటు చేయవచ్చు.
టార్గెట్ ప్రోటీన్ మాలిక్యులర్ సైజు (kDa), జెల్ ఏకాగ్రత మరియు బదిలీ సమయం
80---140 8% 1.5-2.0
25---80 10% 1.5
15—40 12% 0.75
<20 15% 0.5
(2) ప్రయోగాత్మక ఆపరేషన్
(1) ఫిల్టర్ పేపర్ మరియు మెమ్బ్రేన్ తయారీ (ఎలెక్ట్రోఫోరేసిస్‌కు 20 నిమిషాల ముందు తయారీ ప్రారంభించాలి).
ఎ. తక్షణమే సిద్ధం చేయని బదిలీ బఫర్‌లు తగినంతగా ఉన్నాయో లేదో తనిఖీ చేయండి.
బి. ఫిల్టర్ పేపర్ మరియు సరైన పరిమాణంలో పొర ఉందో లేదో తనిఖీ చేయండి.
C. మెథనాల్‌లో పొరను సుమారు 1-2 నిమిషాలు ముంచండి.ఆపై బదిలీ బఫర్‌కు బదిలీ చేయబడింది.
D. తగిన అంటుకునే ఫిల్టర్ పేపర్ మరియు మెమ్బ్రేన్ ఫిల్టర్ పేపర్‌ను వరుసగా బదిలీ బఫర్‌లో నానబెట్టండి.
బదిలీ బఫర్‌లోకి ప్రవేశించేటప్పుడు PDVF మెమ్బ్రేన్ మిథనాల్‌లో ఎంతకాలం నానబెట్టాలి?
PVDF హైడ్రోఫోబిక్, మరియు బదిలీ బఫర్‌లో నానబెట్టడం కష్టం.మిథనాల్ చికిత్స తర్వాత, నానబెట్టడం సులభం.PVDF యొక్క ముందస్తు చికిత్స ఏమిటంటే, దానిని మిథనాల్‌తో నానబెట్టడం మరియు సక్రియం చేయడం, ఆపై పూర్తిగా నానబెట్టిన తర్వాత స్వేదనజలంతో రెండుసార్లు కడగడం.మిథనాల్ బుడగలు ఉపయోగించడం యొక్క ఉద్దేశ్యం PVDF పొరపై ధనాత్మకంగా చార్జ్ చేయబడిన సమూహాలను సక్రియం చేయడం మరియు ప్రతికూలంగా చార్జ్ చేయబడిన ప్రోటీన్‌లతో బంధించడం సులభం చేయడం.
ప్రజలు సాధారణంగా 5-20 నిమిషాలు ఉపయోగిస్తారు.ఇది జిగురును తీసుకునే సమయంలో అదే సమయంలో నానబెట్టవచ్చు మరియు ఇది సుమారు 5 నిమిషాలు పడుతుందని అంచనా వేయబడింది.ప్రభావం చెడ్డది కాదు.గతంలో, కొంతమంది వెబ్‌ఫ్రెండ్‌లు ప్రాసెసింగ్ సమయం పెద్దగా పట్టింపు లేదని, అయితే కీలకం సినిమా నాణ్యత అని పోస్ట్ చేసారు.అది నిజం.మెంబ్రేన్ పూర్తిగా నానబెట్టినంత కాలం, అది సరిగ్గా ఉండాలి.
హైబాండ్ యొక్క PVDF స్పెసిఫికేషన్ క్రింది విధంగా ఉంది: "మెమ్బ్రేన్‌ను 100% మెటానాల్ (10 సెకన్లు)లో ముందుగా తడి చేయండి".కనీసం 10 సెకన్ల పాటు నానబెట్టడం సరైనదని నా అవగాహన.వాస్తవానికి, 10 సెకన్లు లేదా 10 నిమిషాలు నానబెట్టడం మంచిది.
(2) బదిలీ
ఎ. ఎలక్ట్రిక్ ట్రాన్స్‌ఫర్ ఇన్‌స్ట్రుమెంట్‌పై దిగువ ఫిల్టర్ పేపర్‌ను వేయండి.సాధారణంగా మూడు పొరలను ఉపయోగిస్తారు.
బి. పొరను ఫిల్టర్ పేపర్‌పై పొరకు వ్యతిరేకంగా వేయండి, మెమ్బ్రేన్ మరియు ఫిల్టర్ పేపర్ మధ్య బుడగలు ఉండకుండా జాగ్రత్త వహించండి మరియు మెమ్బ్రేన్ తడిగా ఉండేలా మెంబ్రేన్‌పై కొంత బదిలీ బఫర్‌ను పోయాలి.
C. జిగురును తీసివేసి, స్టాక్ జెల్‌ను తీసివేసి, దానిని జాగ్రత్తగా ఫిల్మ్‌లోకి తరలించండి.
D. చిత్రం యొక్క ఎగువ ఎడమ మూలను కత్తిరించండి మరియు పెన్సిల్‌తో ఫిల్మ్‌పై జిగురు స్థానాన్ని గుర్తించండి.
E. జిగురుపై ఉన్న జిగురుకు వ్యతిరేకంగా వడపోత కాగితం ముక్కను కవర్ చేయండి.కొంత బదిలీ బఫర్‌ను పోసి రెండు ముక్కల వడపోత కాగితాన్ని వేయండి.
F. ఎలక్ట్రిక్ ట్రాన్స్‌ఫర్ ఇన్‌స్ట్రుమెంట్‌ను ఇన్‌స్టాల్ చేయండి మరియు అవసరాలకు అనుగుణంగా అవసరమైన కరెంట్ మరియు సమయాన్ని ఎంచుకోండి.
G. బదిలీ ప్రక్రియలో, వోల్టేజ్ మార్పు ఏ సమయంలోనైనా గమనించబడుతుంది మరియు ఏదైనా అసాధారణత సమయానికి సర్దుబాటు చేయబడుతుంది.
పోస్ట్ సమయం: సెప్టెంబర్-07-2022
