Аергыч клейны ничек кулланырга?- 1 өлеш

Аергыч клейны ничек кулланырга?

Көнбатыш блот мембранасы күчү

Ток хәрәкәте астында протеин гельдән каты ташучыга (мембранага) күчерелә.

Мембрананы сайлау: бастыруда еш кулланыла торган каты фазалы материалларга NC мембранасы, DBM, DDT, нейлон мембранасы, PVDF һ.б. керә.Ике спецификация бар: иммобилон-р (0,45ум) һәм иммобилон PSQ (MW <20kDa өчен 0,2ум).

Ярым коры ысул

Ягъни, гель интерлейер комбинациясе фильтр кәгазе арасында тапшыру буферы белән урнаштырыла, һәм ток күчерү эффектына ирешү өчен фильтр кәгазендә урнаштырылган буфер аша үткәрелә.Агым кино клейында турыдан-туры эшләгәнгә, тапшыру шартлары чагыштырмача кырыс, ләкин тапшыру вакыты кыска һәм эффективлыгы югары.

1) эксперимент шартларын сайлау

Ток 1ма-2ма / см2, һәм без гадәттә 100МА / мембрананы кулланабыз.Күчерү вакыты максатлы протеин молекуласы һәм гель концентрациясенә карап сайланырга мөмкин, һәм фактик ситуациягә туры китереп көйләнергә мөмкин.

Максатлы протеин молекуляр зурлыгы (kDa), гель концентрациясе һәм тапшыру вакыты

80 --- 140 8% 1,5-2.0

25 --- 80 10% 1.5

15-40 12% 0,75

<20 15% 0,5

2) эксперименталь операция

(1) Фильтр кәгазен һәм мембрананы әзерләү (әзерлек электрофорезга 20 минут кала башланырга тиеш).

A. Күчерү буферлары җитәрлекме, шунда ук әзерләнмәвен тикшерегез.

B. Фильтр кәгазе һәм тиешле зурлыктагы мембрана барлыгын тикшерегез.

C. Мембрананы метанолга 1-2 минут чумыгыз.Аннары тапшыру буферына күчерелде.

D. Тиешле ябыштыргыч фильтр кәгазен һәм мембрана фильтр кәгазен тапшыру буферына кертегез.

Күчерү буферына кергәндә PDVF мембранасы метанолга күпме вакыт чумарга тиеш?

PVDF гидрофобик, һәм тапшыру буферына чуму кыен.Метанол белән эшкәртелгәннән соң, суга батыру җиңелрәк.ПВДФны алдан әйтү - аны метанол белән сугару һәм активлаштыру, аннары яхшылап чумганнан соң дистиллы су белән ике тапкыр юу.Метанол күбекләрен куллануның максаты - PVDF мембранасында уңай корылган төркемнәрне активлаштыру һәм тискәре корылган аксымнар белән бәйләнешне җиңеләйтү.

Кешеләр аны гадәттә 5-20 минут кулланалар.Аны клей алу белән бер үк вакытта суга батырырга мөмкин, һәм якынча 5 минут вакыт кирәк булыр.Эффект начар түгел.Элек кайбер веб-дуслар эшкәртү вакыты мөһим түгел, дип хәбәр иттеләр, ләкин ачкыч фильмның сыйфаты иде.Дөрес.Мембрана тулысынча дымланган булса, әйбәт булырга тиеш.

Hybond-ның PVDF спецификациясе түбәндәгечә: "Мембрананы 100% метанолда (10 секунд) дымлагыз".Минем аңлавым, ким дигәндә 10 секунд чумарга ярый.Чынлыкта, 10 секунд яки 10 минут чумарга ярый.

2) Күчерү

A. Электр тапшыру коралына аскы фильтр кәгазен куегыз.Гадәттә өч катлам кулланыла.

B. Мембрананы фильтр кәгазенә мембранага каршы куегыз, мембрана белән фильтр кәгазе арасында күбекләр булмасын, мембрананы дымлы тоту өчен мембранага күчерү буферы куегыз.

C. Клейны суырыгыз, стакан гелен алыгыз һәм аны кинога күчерегез.

D. Фильмның өске сул почмагын кисегез һәм фильмдагы клей позициясен карандаш белән билгеләгез.

E. Фильтр кәгазенең бер өлешен клейдагы клейга каплагыз.Күчерү буферын салыгыз һәм ике кисәк фильтр кәгазе куегыз.

F. Электр тапшыру коралын урнаштырыгыз һәм кирәк булган токны һәм вакытны сайлагыз.

Г. Күчерү процессында көчәнешнең үзгәрүе теләсә кайсы вакытта күзәтелергә тиеш, һәм аномальлек вакытында көйләнергә тиеш.