ئايرىش يېلىمى قانداق ئىشلىتىش كېرەك؟
Western blot membrane transfer
توكنىڭ ھەرىكىتىگە ئاساسەن ، ئاقسىل گېلىدىن قاتتىق توشۇغۇچى (پەردە) گە يۆتكىلىدۇ.
پەردىلەرنى تاللاش: بېسىپ چىقىرىشتا كۆپ ئىشلىتىلىدىغان قاتتىق فازا ماتېرىياللىرى NC پەردىسى ، DBM ، DDT ، نىلون پەردىسى ، PVDF قاتارلىقلارنى ئۆز ئىچىگە ئالىدۇ.Immobilon-p (0.45um) ۋە immobilon PSQ (MW <20kDa ئۈچۈن 0.2um) دىن ئىبارەت ئىككى خىل ئۆلچەم بار.
يېرىم قۇرۇق ئۇسۇل
يەنى گېلى ئۆز-ئارا بىرلەشتۈرۈش سۈزگۈچ قەغەز بىلەن يۆتكىلىشچان بۇففېرنىڭ ئوتتۇرىسىغا قويۇلغان بولۇپ ، توك سۈزگۈچ قەغىزىگە چاپلانغان بۇففېر ئارقىلىق ئېلىپ بېرىلىپ ، يۆتكىلىش ئۈنۈمى قولغا كېلىدۇ.نۆۋەتتىكى فىلىم بىۋاسىتە يېلىمدا ھەرىكەت قىلىدىغان بولغاچقا ، يۆتكىلىش شارائىتى بىر قەدەر ناچار ، ئەمما يۆتكىلىش ۋاقتى قىسقا ، ئۈنۈمى يۇقىرى.
(1) تەجرىبە شارائىتىنى تاللاش
ئېقىمى 1ma-2ma / cm2 ، بىز ئادەتتە 100mA / پەردىسىنى ئىشلىتىمىز.يۆتكىلىش ۋاقتىنى نىشاندىكى ئاقسىل مولېكۇلاسىنىڭ چوڭ-كىچىكلىكى ۋە گېلىنىڭ قويۇقلۇقىغا ئاساسەن تاللىغىلى بولىدۇ ، ھەمدە ئەمەلىي ئەھۋالغا ئاساسەن مۇۋاپىق تەڭشىگىلى بولىدۇ.
نىشانلىق ئاقسىل مولېكۇلا چوڭلۇقى (kDa) ، گېلىنىڭ قويۇقلۇقى ۋە يۆتكىلىش ۋاقتى
80 --- 140 8% 1.5-2.0
25 --- 80 10% 1.5
15—40 12% 0.75
<20 15% 0.5
(2) تەجرىبە مەشغۇلاتى
(1) سۈزگۈچ قەغەز ۋە پەردىلەرنى تەييارلاش (ئېلېكتروفورېزدىن 20 مىنۇت بۇرۇن تەييارلىق قىلىش كېرەك).
جاۋاب: دەرھال تەييارلانمىغان يۆتكىلىشچان بۇففېرلارنىڭ بار-يوقلۇقىنى تەكشۈرۈڭ.
B. مۇۋاپىق چوڭلۇقتىكى سۈزگۈچ قەغەز ۋە پەردىنىڭ بار-يوقلۇقىنى تەكشۈرۈڭ.
C. پەردىسىنى مېتانولغا 1-2 مىنۇت چىلاپ قويۇڭ.ئاندىن يۆتكىلىشچان بۇففېرغا يۆتكەلدى.
D. مۇناسىپ چاپلاشتۇرغۇچ سۈزگۈچ قەغەز ۋە پەردە سۈزگۈچ قەغىزىنى ئايرىم-ئايرىم ھالدا يۆتكىلىشچان بۇففېرغا چىلاپ قويۇڭ.
يۆتكىلىشچان بۇففېرغا كىرگەندە PDVF پەردىسى قانچىلىك ۋاقىت مېتانولغا چىلىشى كېرەك؟
PVDF گىدروپوبىك بولۇپ ، يۆتكىلىشچان بۇففېرغا چىلاش تەس.مېتانولنى داۋالىغاندىن كېيىن ، چىلاش ئاسان.PVDF نىڭ ئالدىنى ئېلىش مېتانول بىلەن چىلاپ ئاكتىپلاش ، ئاندىن پاكىز چىلاپ بولغاندىن كېيىن ئارىلاشتۇرۇلغان سۇ بىلەن ئىككى قېتىم يۇيۇش.مېتانول كۆپۈكچىلىرىنى ئىشلىتىشتىكى مەقسەت PVDF پەردىسىدىكى مۇسبەت زەرەتلەنگەن گۇرۇپپىلارنى قوزغىتىش ۋە مەنپىي زەرەتلەنگەن ئاقسىللار بىلەن باغلىنىشنى ئاسانلاشتۇرۇش.
كىشىلەر ئۇنى ئادەتتە 5-20 مىنۇت ئىشلىتىدۇ.ئۇنى يېلىم بىلەن تەڭ چىلاپ قويغىلى بولىدۇ ، مۆلچەرلىنىشىچە 5 مىنۇت ئەتراپىدا ۋاقىت كېتىدىكەن.بۇنىڭ ئۈنۈمى يامان ئەمەس.ئىلگىرى بەزى تورداشلار بىر تەرەپ قىلىش ۋاقتىنىڭ ئانچە مۇھىم ئەمەسلىكىنى ، ئەمما ئاچقۇچ فىلىمنىڭ سۈپىتى ئىكەنلىكىنى ئېلان قىلغان.بۇ راست.پەردىسىنى پۈتۈنلەي چىلاپ قويسىلا ، بولىدۇ.
Hybond نىڭ PVDF ئۆلچىمىدە مۇنداق يېزىلغان: «پەردىنى% 100 مېتانول (10 سېكۇنت) بۇرۇن ھۆل قىلىڭ».مېنىڭ چۈشىنىشىمچە ، كەم دېگەندە 10 سېكۇنت چىلاپ قويسىڭىز بولىدۇ.ئەمەلىيەتتە ، 10 سېكۇنت ياكى 10 مىنۇت چىلاپ قويسىڭىز بولىدۇ.
(2) يۆتكەش
جاۋاب: تۆۋەن سۈزگۈچ قەغەزنى توك يەتكۈزۈش قورالىغا قويۇڭ.ئادەتتە ئۈچ قەۋەت ئىشلىتىلىدۇ.
Б.
C. يېلىمنى سويۇپ ، دۆۋىلەنگەن گېلىنى ئېلىڭ ھەمدە ئېھتىياتچانلىق بىلەن پىلاستىنكىغا يۆتكەڭ.
D. فىلىمنىڭ سول ئۈستى ئۈستى بۇلۇڭىنى كېسىپ ، قەلەم بىلەن فىلىمنىڭ يېلىم ئورنىنى بەلگە قىلىڭ.
E. بىر پارچە سۈزگۈچ قەغەزنى يېلىمدىكى يېلىمغا يېپىش.بىر قىسىم يۆتكىلىشچان بۇففېرنى تۆكۈپ ، ئىككى پارچە سۈزگۈچ قەغەز قويۇڭ.
F. توك يەتكۈزۈش قورالىنى ئورنىتىپ ، ئېھتىياجغا ئاساسەن نۆۋەتتىكى ۋە ۋاقىتنى تاللاڭ.
G. يۆتكىلىش جەريانىدا توك بېسىمىنىڭ ئۆزگىرىشى ھەر ۋاقىت كۆزىتىلىدۇ ، نورمالسىزلىق ۋاقتىدا تەڭشىلىدۇ.
يوللانغان ۋاقتى: 07-سېنتەبىردىن 20-سېنتەبىرگىچە
