Conas gliú scaradh a úsáid?
Aistriú membrane blot an iarthair
Faoi ghníomhaíocht an tsrutha, aistrítear an próitéin ón nglóthach go dtí an t-iompróir soladach (membrane).
Roghnú membrane: I measc na n-ábhar soladach-chéim a úsáidtear go coitianta i bpriontáil tá membrane NC, DBM, DDT, membrane níolón, PVDF, etc. Roghnaimid PVDF (fluairíd polaivinileideéin), a bhfuil asaithe próitéin níos fearr, neart fisiceach agus comhoiriúnacht cheimiceach níos fearr.Tá dhá shonraíocht ann: immobilon-p (0.45um) agus PSQ immobilon (0.2um le haghaidh MW < 20kDa).
Modh leath-tirim
Is é sin, cuirtear an teaglaim interlayer glóthach idir an páipéar scagaire leis an maolán aistrithe, agus seoltar an sruth tríd an maolán atá asaithe ar an bpáipéar scagaire chun an éifeacht aistrithe a bhaint amach.Toisc go ngníomhaíonn an sruth go díreach ar an gliú scannán, tá na coinníollacha aistrithe sách dian, ach tá an t-am aistrithe gearr agus tá an éifeachtacht ard.
(1) roghnú coinníollacha turgnamhacha
Is é an sruth 1ma-2ma / cm2, agus de ghnáth úsáidimid 100mA / membrane.Is féidir an t-am aistrithe a roghnú de réir mhéid an mhóilín próitéin sprioc agus an tiúchan glóthach, agus is féidir é a choigeartú go cuí de réir an staid iarbhír.
Dírigh ar mhéid móilíneach próitéine (kDa), tiúchan glóthach agus am aistrithe
80---140 8% 1.5-2.0
25--- 80 10% 1.5
15—40 12% 0.75
<20 15% 0.5
(2) oibriú turgnamhach
(1) Ullmhú páipéar scagtha agus membrane (tosófar an t-ullmhúchán 20 nóiméad roimh leictreafóiréis).
A. Seiceáil an bhfuil go leor maoláin aistrithe ann, nach n-ullmhaítear láithreach.
B. Seiceáil an bhfuil páipéar scagtha agus membrane den mhéid cuí.
C. Tum an scannán i meatánól ar feadh thart ar 1-2 nóiméad.Agus ansin aistríodh chuig an maolán aistrithe.
D. Soak an páipéar scagtha greamaitheacha cuí agus an páipéar scagtha membrane isteach sa mhaolán aistrithe faoi seach.
Cé chomh fada is ceart don scannán PDVF sáithiú i meatánól agus é ag dul isteach sa mhaolán aistrithe?
Tá PVDF hidreafóbach, agus tá sé deacair maolán aistrithe a sáithiú.Tar éis cóireáil meatánóil, tá sé níos éasca soak.Is éard atá i gceist le réamhchóireáil PVDF ná é a mhúchadh agus a ghníomhachtú le meatánól, agus ansin é a nigh faoi dhó le huisce driogtha tar éis é a sáithiú go críochnúil.Is é an cuspóir atá le boilgeoga meatánóil a úsáid ná na grúpaí a ghearrtar go dearfach ar an membrane PVDF a ghníomhachtú agus é a dhéanamh níos éasca a cheangal le próitéiní a luchtaítear go diúltach.
De ghnáth úsáideann daoine é ar feadh 5-20 nóiméad.Is féidir é a bheith sáithithe ag an am céanna leis an gliú a ghlacadh, agus meastar go dtógfaidh sé thart ar 5 nóiméad.Níl an éifeacht dona.San am atá caite, chuir roinnt cairde gréasáin in iúl nach raibh mórán tábhachta ag baint leis an am próiseála, ach ba é cáilíocht an scannáin an eochair.Sin ceart.Chomh fada agus go bhfuil an membrane sáithithe go hiomlán, ba chóir go mbeadh sé ceart go leor.
Léann sonraíocht PVDF Hybond mar seo a leanas: "réamhfhliuch an scannán i meitianól 100% (10 soicind)".Is é an tuiscint atá agam ná go bhfuil sé ceart go leor maothú ar feadh 10 soicind ar a laghad.Déanta na fírinne, tá sé ceart go leor maos ar feadh 10 soicind nó 10 nóiméad.
(2) Aistriú
A. Leag an páipéar scagaire níos ísle ar an ionstraim aistrithe leictreachais.Go ginearálta úsáidtear trí shraith.
B. Leag an scannán ar an bpáipéar scagaire i gcoinne an membrane, tabhair aird gan boilgeoga a bheith idir an membrane agus an páipéar scagaire, agus doirt roinnt maolán aistrithe ar an membrane chun an membrane a choinneáil fliuch.
C. Bain an gliú amach, bain an glóthach cruachta agus bog go cúramach é ar an scannán.
D. Gearr amach an chúinne uachtarach ar chlé den scannán agus marcáil an seasamh gliú ar an scannán le peann luaidhe.
E. Clúdaigh píosa páipéir scagaire i gcoinne an gliú ar an gliú.Doirt roinnt maolán aistrithe agus leag dhá phíosa páipéir scagaire.
F. Suiteáil an ionstraim aistrithe leictreachais agus roghnaigh an reatha agus an t-am riachtanach de réir na riachtanas.
G. Le linn an phróisis aistrithe, breathnófar an t-athrú voltais tráth ar bith, agus déanfar aon neamhghnáchaíocht a choigeartú in am.
Am postála: Sep-07-2022
