Aýralyk ýelimini nädip ulanmaly?- 1-nji bölüm

Aýralyk ýelimini nädip ulanmaly?

Günbatar blot membranasynyň geçirilmegi

Tokuň täsiri astynda belok jelden gaty göterijä (membrana) geçirilýär.

Membranany saýlamak: Çap etmekde köplenç ulanylýan gaty fazaly materiallara NC membranasy, DBM, DDT, neýlon membranasy, PVDF we ş.m. girýär, beloklaryň siňdirilmegi, fiziki güýç we has gowy himiki sazlaşykly PVDF (poliwiniliden ftorid) saýlaýarys.Iki aýratynlyk bar: immobilon-p (0.45um) we immobilon PSQ (MW <20kDa üçin 0,2um).

Dryarym gury usul

.Agny, jel interleýer kombinasiýasy geçiriji bufer bilen süzgüç kagyzynyň arasynda ýerleşdirilýär we tok geçiriş effektine ýetmek üçin süzgüç kagyzynda ýerleşdirilen bufer arkaly geçirilýär.Häzirki filmiň ýelimine gönüden-göni täsir edýändigi sebäpli, geçiriş şertleri birneme kyn, ýöne geçiriş wagty gysga we netijeliligi ýokary.

(1) synag şertlerini saýlamak

Tok 1ma-2ma / cm2, adatça 100mA / membranany ulanýarys.Geçiriş wagty maksatly belok molekulasynyň ululygyna we jeliň konsentrasiýasyna görä saýlanyp bilner we hakyky ýagdaýa görä sazlanyp bilner.

Maksatly belok molekulasynyň ululygy (kDa), jeliň konsentrasiýasy we geçiriş wagty

80 --- 140 8% 1.5-2.0

25 --- 80 10% 1.5

15-40 12% 0.75

<20 15% 0,5

(2) synag tejribesi

(1) Süzgüç kagyzy we membranany taýýarlamak (taýýarlyk elektroforezden 20 minut öň başlar).

A. Derrew taýýarlanmadyk ýeterlik buferleriň bardygyny ýa-da ýokdugyny barlaň.

B. Süzgüçli kagyzyň we ululykdaky membrananyň bardygyny ýa-da ýokdugyny barlaň.

C. Membranany metanola 1-2 minut çümdüriň.Soň bolsa geçiriş buferine geçirildi.

D. Degişli ýelimleýji süzgüç kagyzyny we membrananyň süzgüç kagyzyny degişlilikde geçiriş buferine siňdiriň.

Geçiriş buferine girende PDVF membranasy näçe wagtlap metanola çümmeli?

PVDF gidrofobiki, geçiriş buferine siňdirmek kyn.Metanol bejergisinden soň, siňdirmek has aňsatdyr.PVDF-iň öňüni almak, ony metanol bilen siňdirmek we işjeňleşdirmek, soňra gowy ýuwlandan soň distillirlenen suw bilen iki gezek ýuwmakdyr.Metanol köpürjiklerini ulanmagyň maksady, PVDF membranasyndaky pololyitel zarýadly toparlary işjeňleşdirmek we otrisatel zarýadly beloklar bilen baglanyşmagy aňsatlaşdyrmak.

Adamlar köplenç 5-20 minut ulanýarlar.Theelim almak bilen bir wagtyň özünde siňdirilip bilner we takmynan 5 minut gerek bolar diýlip çaklanylýar.Munuň täsiri erbet däl.Geçmişde käbir web dostlary gaýtadan işlemegiň wagtynyň kän bir ähmiýetiniň ýokdugyny habar berdiler, ýöne esasy zat filmiň hili.Bu hakykat.Membranany doly siňdirýänçä, gowy bolmaly.

Hybondyň PVDF spesifikasiýasy şeýle ýazylýar: "Membranany 100% metanolda (10 sekunt) çyglaň".Meniň düşünşim, azyndan 10 sekunt çümdürmek dogry.Aslynda 10 sekunt ýa-da 10 minut çümdürmek dogry.

(2) Geçirmek

A. Aşaky süzgüç kagyzyny elektrik geçiriji guralyň üstünde goýuň.Adatça üç gatlak ulanylýar.

B. Membranany süzgüç kagyzynyň üstünde membrananyň üstünde goýuň, membrananyň we süzgüç kagyzynyň arasynda köpürjikleriň bolmazlygyna üns beriň we membranany çygly saklamak üçin biraz geçiriji bufer guýuň.

C. ueelimiň gabygyny çalyň, stakanyň jelini aýyryň we seresaplylyk bilen filme geçiriň.

D. Filmiň ýokarky çep burçuny kesiň we filmdäki ýelim ýagdaýyny galam bilen belläň.

E. Süzgüç kagyzynyň bir bölegini ýelimiň üstüne ýapyň.Geçiriş buferini döküň we iki bölek süzgüç kagyzy goýuň.

F. Elektrik geçiriji guraly guruň we zerurlyklara görä zerur tok we wagty saýlaň.

G. Geçiriş prosesinde naprýatageeniýeniň üýtgemegi islendik wagt berjaý ediler we islendik näsazlyk wagtynda düzediler.