பிரிப்பு பசை எவ்வாறு பயன்படுத்துவது?
வெஸ்டர்ன் பிளட் சவ்வு பரிமாற்றம்
மின்னோட்டத்தின் செயல்பாட்டின் கீழ், புரதம் ஜெல்லில் இருந்து திடமான கேரியருக்கு (சவ்வு) மாற்றப்படுகிறது.
சவ்வு தேர்வு: அச்சிடுவதில் பொதுவாகப் பயன்படுத்தப்படும் திட-நிலைப் பொருட்களில் NC சவ்வு, DBM, DDT, நைலான் சவ்வு, PVDF போன்றவை அடங்கும். சிறந்த புரத உறிஞ்சுதல், உடல் வலிமை மற்றும் சிறந்த இரசாயன இணக்கத்தன்மை கொண்ட PVDF (பாலிவினைலைடின் புளோரைடு) ஐ நாங்கள் தேர்வு செய்கிறோம்.இரண்டு விவரக்குறிப்புகள் உள்ளன: immobilon-p (0.45um) மற்றும் immobilon PSQ (MW <20kDaக்கு 0.2um).
அரை உலர் முறை
அதாவது, ஜெல் இன்டர்லேயர் கலவையானது, டிரான்ஸ்ஃபர் பேப்பருடன் ஃபில்டர் பேப்பருக்கு இடையில் வைக்கப்பட்டு, டிரான்ஸ்ஃபர் எஃபெக்டை அடைய வடிகட்டி தாளில் உறிஞ்சப்பட்ட பஃபர் மூலம் மின்னோட்டம் நடத்தப்படுகிறது.மின்னோட்டம் நேரடியாக ஃபிலிம் பசை மீது செயல்படுவதால், பரிமாற்ற நிலைமைகள் ஒப்பீட்டளவில் கடுமையானவை, ஆனால் பரிமாற்ற நேரம் குறைவாக உள்ளது மற்றும் செயல்திறன் அதிகமாக உள்ளது.
(1) சோதனை நிலைமைகளின் தேர்வு
மின்னோட்டம் 1ma-2ma / cm2, நாங்கள் வழக்கமாக 100mA / membrane ஐப் பயன்படுத்துகிறோம்.இலக்கு புரத மூலக்கூறின் அளவு மற்றும் ஜெல் செறிவு ஆகியவற்றின் படி பரிமாற்ற நேரத்தைத் தேர்ந்தெடுக்கலாம், மேலும் உண்மையான சூழ்நிலைக்கு ஏற்ப சரியான முறையில் சரிசெய்யலாம்.
இலக்கு புரத மூலக்கூறு அளவு (kDa), ஜெல் செறிவு மற்றும் பரிமாற்ற நேரம்
80---140 8% 1.5-2.0
25---80 10% 1.5
15—40 12% 0.75
<20 15% 0.5
(2) பரிசோதனை செயல்பாடு
(1) வடிகட்டி காகிதம் மற்றும் சவ்வு தயாரித்தல் (எலக்ட்ரோபோரேசிஸுக்கு 20 நிமிடங்களுக்கு முன் தயாரிப்பு தொடங்கப்படும்).
ஏ. போதுமான பரிமாற்ற இடையகங்கள் உள்ளனவா என்பதைச் சரிபார்க்கவும், அவை உடனடியாகத் தயாரிக்கப்படவில்லை.
B. வடிகட்டி காகிதம் மற்றும் சரியான அளவு சவ்வு உள்ளதா என சரிபார்க்கவும்.
C. மெத்தனாலில் மென்படலத்தை சுமார் 1-2 நிமிடங்கள் மூழ்க வைக்கவும்.பின்னர் பரிமாற்ற இடையகத்திற்கு மாற்றப்பட்டது.
D. பொருத்தமான பிசின் வடிகட்டி காகிதம் மற்றும் சவ்வு வடிகட்டி காகிதத்தை முறையே பரிமாற்ற இடையகத்தில் ஊற வைக்கவும்.
பரிமாற்ற இடையகத்திற்குள் நுழையும் போது PDVF சவ்வு மெத்தனாலில் எவ்வளவு நேரம் ஊற வேண்டும்?
PVDF ஹைட்ரோபோபிக் ஆகும், மேலும் பரிமாற்ற இடையகத்தில் ஊறவைப்பது கடினம்.மெத்தனால் சிகிச்சைக்குப் பிறகு, ஊறவைப்பது எளிது.PVDF இன் முன் சிகிச்சை என்பது மெத்தனால் மூலம் ஊறவைத்து செயல்படுத்துவது, பின்னர் நன்கு ஊறவைத்த பிறகு காய்ச்சி வடிகட்டிய நீரில் இரண்டு முறை கழுவ வேண்டும்.மெத்தனால் குமிழிகளைப் பயன்படுத்துவதன் நோக்கம் PVDF சவ்வில் நேர்மறையாக சார்ஜ் செய்யப்பட்ட குழுக்களை செயல்படுத்துவது மற்றும் எதிர்மறையாக சார்ஜ் செய்யப்பட்ட புரதங்களுடன் பிணைப்பதை எளிதாக்குவதாகும்.
மக்கள் பொதுவாக 5-20 நிமிடங்கள் பயன்படுத்துகின்றனர்.இது பசை எடுக்கும் அதே நேரத்தில் ஊறவைக்கப்படலாம், மேலும் அது சுமார் 5 நிமிடங்கள் எடுக்கும் என்று மதிப்பிடப்பட்டுள்ளது.விளைவு மோசமாக இல்லை.கடந்த காலங்களில், சில வலை நண்பர்கள் செயலாக்க நேரம் அதிகம் இல்லை, ஆனால் முக்கியமானது படத்தின் தரம் என்று பதிவிட்டுள்ளனர்.அது உண்மை.சவ்வு முழுவதுமாக நனைந்திருக்கும் வரை, அது சரியாக இருக்க வேண்டும்.
Hybond இன் PVDF விவரக்குறிப்பு பின்வருமாறு கூறுகிறது: "சவ்வை 100% மெட்டானாலில் (10 வினாடிகள்) முன் ஈரப்படுத்தவும்".குறைந்தது 10 வினாடிகள் ஊறவைப்பது நல்லது என்பது என் புரிதல்.உண்மையில், 10 வினாடிகள் அல்லது 10 நிமிடங்கள் ஊறவைப்பது நல்லது.
(2) இடமாற்றம்
A. மின்சார பரிமாற்ற கருவியில் கீழ் வடிகட்டி காகிதத்தை இடுங்கள்.பொதுவாக மூன்று அடுக்குகள் பயன்படுத்தப்படுகின்றன.
B. சவ்வை வடிகட்டி தாளில் சவ்வுக்கு எதிராக வைக்கவும், சவ்வுக்கும் வடிகட்டி காகிதத்திற்கும் இடையில் குமிழ்கள் வராமல் பார்த்துக் கொள்ளுங்கள், மேலும் சவ்வு ஈரமாக இருக்க சவ்வு மீது சிறிது பரிமாற்ற இடையகத்தை ஊற்றவும்.
சி. பசையை உரிக்கவும், ஸ்டாக் ஜெல்லை அகற்றி கவனமாக படத்திற்கு நகர்த்தவும்.
D. படத்தின் மேல் இடது மூலையைத் துண்டித்து, பென்சிலால் படத்தின் மீது பசை நிலையைக் குறிக்கவும்.
ஈ. பசை மீது பசைக்கு எதிராக வடிகட்டி காகிதத்தை மூடி வைக்கவும்.சில பரிமாற்ற இடையகத்தை ஊற்றி, வடிகட்டி காகிதத்தின் இரண்டு துண்டுகளை இடுங்கள்.
எஃப். மின்சார பரிமாற்ற கருவியை நிறுவி, தேவைக்கேற்ப தேவையான மின்னோட்டத்தையும் நேரத்தையும் தேர்ந்தெடுக்கவும்.
G. பரிமாற்றச் செயல்பாட்டின் போது, எந்த நேரத்திலும் மின்னழுத்த மாற்றம் கவனிக்கப்பட வேண்டும், மேலும் ஏதேனும் அசாதாரணம் சரியான நேரத்தில் சரிசெய்யப்படும்.
இடுகை நேரம்: செப்-07-2022
