តើត្រូវប្រើកាវបំបែកដោយរបៀបណា?
ការផ្ទេរភ្នាស blot ខាងលិច
នៅក្រោមសកម្មភាពនៃចរន្តប្រូតេអ៊ីនត្រូវបានផ្ទេរពីជែលទៅក្រុមហ៊ុនដឹកជញ្ជូនរឹង (ភ្នាស) ។
ការជ្រើសរើសភ្នាស៖ វត្ថុធាតុដំណាក់កាលរឹងដែលប្រើជាទូទៅក្នុងការបោះពុម្ពរួមមានភ្នាស NC, DBM, DDT, ភ្នាសនីឡុង, PVDF ជាដើម។ យើងជ្រើសរើស PVDF (ប៉ូលីវីលីនលីនហ្វ្លុយអូរី) ដែលមានការស្រូបយកប្រូតេអ៊ីនប្រសើរជាង កម្លាំងរាងកាយ និងភាពឆបគ្នានៃសារធាតុគីមីប្រសើរជាង។មានការបញ្ជាក់ចំនួនពីរ៖ immobilon-p (0.45um) និង immobilon PSQ (0.2um for MW < 20kDa)។
វិធីសាស្រ្តពាក់កណ្តាលស្ងួត
នោះគឺការបញ្ចូលគ្នារវាងស្រទាប់ជែលត្រូវបានដាក់នៅចន្លោះក្រដាសតម្រងជាមួយនឹងសតិបណ្ដោះអាសន្នផ្ទេរ ហើយចរន្តត្រូវបានធ្វើឡើងតាមរយៈទ្រនាប់ស្រូបទាញនៅលើក្រដាសតម្រង ដើម្បីសម្រេចបាននូវប្រសិទ្ធិភាពផ្ទេរ។ដោយសារតែចរន្តធ្វើសកម្មភាពដោយផ្ទាល់លើកាវខ្សែភាពយន្ត លក្ខខណ្ឌនៃការផ្ទេរគឺពិបាកបន្តិច ប៉ុន្តែពេលវេលាផ្ទេរគឺខ្លី ហើយប្រសិទ្ធភាពខ្ពស់។
(1) ការជ្រើសរើសលក្ខខណ្ឌពិសោធន៍
ចរន្តគឺ 1ma-2ma / cm2 ហើយជាធម្មតាយើងប្រើ 100mA / ភ្នាស។ពេលវេលាផ្ទេរអាចត្រូវបានជ្រើសរើសតាមទំហំនៃម៉ូលេគុលប្រូតេអ៊ីនគោលដៅ និងកំហាប់ជែល ហើយអាចកែតម្រូវបានសមស្របទៅតាមស្ថានភាពជាក់ស្តែង។
កំណត់ទំហំម៉ូលេគុលប្រូតេអ៊ីន (kDa) ការប្រមូលផ្តុំជែល និងពេលវេលាផ្ទេរ
80---140 8% 1.5-2.0
25---80 10% ១.៥
15–40 12% 0.75
<20 15% 0.5
(2) ប្រតិបត្តិការពិសោធន៍
(1) ការរៀបចំក្រដាសតម្រង និងភ្នាស (ការរៀបចំត្រូវចាប់ផ្តើម 20 នាទីមុនពេល electrophoresis) ។
A. ពិនិត្យមើលថាតើមានសតិបណ្ដោះអាសន្នផ្ទេរគ្រប់គ្រាន់ ដែលមិនត្រូវបានរៀបចំភ្លាមៗ។
ខ. ពិនិត្យមើលថាតើមានក្រដាសចម្រោះ និងភ្នាសដែលមានទំហំសមស្របដែរឬទេ។
គ- ជ្រមុជភ្នាសក្នុងមេតាណុលប្រហែល 1-2 នាទី។ហើយបន្ទាប់មកផ្ទេរទៅសតិបណ្ដោះអាសន្នផ្ទេរ។
ឃ. ត្រាំក្រដាសតម្រង adhesive ដែលសមស្រប និងក្រដាសតម្រងភ្នាសចូលទៅក្នុងទ្រនាប់បញ្ជូនបន្ត។
តើភ្នាស PDVF គួរត្រាំក្នុងមេតាណុលរយៈពេលប៉ុន្មានពេលចូលទៅទ្រនាប់ផ្ទេរ?
PVDF គឺ hydrophobic ហើយវាពិបាកក្នុងការត្រាំនៅក្នុងសតិបណ្ដោះអាសន្នផ្ទេរ។បន្ទាប់ពីការព្យាបាលមេតាណុលវាកាន់តែងាយស្រួលក្នុងការត្រាំ។ការព្យាបាលមុននៃ PVDF គឺត្រូវត្រាំ និងធ្វើឱ្យសកម្មជាមួយមេតាណុល ហើយបន្ទាប់មកលាងសម្អាតវាពីរដងជាមួយនឹងទឹកចម្រោះ បន្ទាប់ពីត្រាំយ៉ាងហ្មត់ចត់។គោលបំណងនៃការប្រើប្រាស់ពពុះមេតាណុលគឺដើម្បីធ្វើឱ្យក្រុមដែលមានបន្ទុកវិជ្ជមាននៅលើភ្នាស PVDF និងធ្វើឱ្យវាកាន់តែងាយស្រួលក្នុងការចងជាមួយនឹងប្រូតេអ៊ីនដែលមានបន្ទុកអវិជ្ជមាន។
ជាធម្មតាមនុស្សប្រើវារយៈពេល 5-20 នាទី។វាអាចត្រូវបានត្រាំក្នុងពេលដំណាលគ្នានឹងការយកកាវហើយវាត្រូវបានគេប៉ាន់ស្មានថាវានឹងចំណាយពេលប្រហែល 5 នាទី។ប្រសិទ្ធភាពមិនអាក្រក់ទេ។កន្លងមក មានមិត្តភ័ក្តិបណ្ដាញមួយចំនួនបានបង្ហោះថា ពេលវេលាដំណើរការមិនមានបញ្ហាច្រើននោះទេ ប៉ុន្តែចំណុចសំខាន់គឺគុណភាពភាពយន្ត។វាជាការពិត។ដរាបណាភ្នាសត្រូវបានត្រាំទាំងស្រុង វាគួរតែយល់ព្រម។
ការបញ្ជាក់ PVDF របស់ Hybond អានដូចខាងក្រោម: "មុនសើមភ្នាសក្នុង 100% មេតាណុល (10 វិនាទី)" ។ការយល់ដឹងរបស់ខ្ញុំគឺថាវាមិនអីទេក្នុងការត្រាំយ៉ាងហោចណាស់ 10 វិនាទី។តាមពិតទៅ វាមិនអីទេក្នុងការត្រាំរយៈពេល 10 វិនាទី ឬ 10 នាទី។
(2) ផ្ទេរ
ក. ដាក់ក្រដាសតម្រងទាបនៅលើឧបករណ៍ផ្ទេរអគ្គិសនី។ជាទូទៅបីស្រទាប់ត្រូវបានប្រើ។
ខ. ដាក់ភ្នាសនៅលើក្រដាសតម្រងទល់នឹងភ្នាស យកចិត្តទុកដាក់កុំឱ្យមានពពុះរវាងភ្នាស និងក្រដាសតម្រង ហើយចាក់សារធាតុបញ្ជូនបន្តមួយចំនួនទៅលើភ្នាស ដើម្បីរក្សាភ្នាសឱ្យសើម។
គ. យកកាវចេញ យកជង់ជែលចេញ ហើយផ្លាស់ទីវាដោយប្រុងប្រយ័ត្នទៅលើខ្សែភាពយន្ត។
ឃ. កាត់ជ្រុងខាងឆ្វេងខាងលើនៃខ្សែភាពយន្ត ហើយសម្គាល់ទីតាំងកាវនៅលើខ្សែភាពយន្តដោយខ្មៅដៃ។
E. គ្របក្រដាសតម្រងមួយដុំទល់នឹងកាវនៅលើកាវ។ចាក់សតិបណ្ដោះអាសន្នផ្ទេរមួយចំនួន ហើយដាក់ក្រដាសចម្រោះពីរដុំ។
F. ដំឡើងឧបករណ៍ផ្ទេរចរន្តអគ្គិសនី ហើយជ្រើសរើសចរន្ត និងពេលវេលាតាមតម្រូវការ។
G. ក្នុងអំឡុងពេលដំណើរការផ្ទេរការផ្លាស់ប្តូរវ៉ុលត្រូវសង្កេតឃើញនៅពេលណាក៏បានហើយភាពមិនប្រក្រតីណាមួយនឹងត្រូវបានកែតម្រូវទាន់ពេលវេលា។
ពេលវេលាបង្ហោះ៖ ថ្ងៃទី 07-07-2022
