ਵਿਭਾਜਨ ਗੂੰਦ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਿਵੇਂ ਕਰੀਏ?
ਪੱਛਮੀ ਧੱਬਾ ਝਿੱਲੀ ਦਾ ਤਬਾਦਲਾ
ਵਰਤਮਾਨ ਦੀ ਕਿਰਿਆ ਦੇ ਤਹਿਤ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨੂੰ ਜੈੱਲ ਤੋਂ ਠੋਸ ਕੈਰੀਅਰ (ਝਿੱਲੀ) ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।
ਝਿੱਲੀ ਦੀ ਚੋਣ: ਛਾਪਣ ਵਿੱਚ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਵਰਤੀਆਂ ਜਾਣ ਵਾਲੀਆਂ ਠੋਸ-ਪੜਾਅ ਵਾਲੀਆਂ ਸਮੱਗਰੀਆਂ ਵਿੱਚ NC ਝਿੱਲੀ, DBM, DDT, ਨਾਈਲੋਨ ਝਿੱਲੀ, PVDF, ਆਦਿ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ। ਅਸੀਂ PVDF (ਪੌਲੀਵਿਨਾਇਲਿਡੀਨ ਫਲੋਰਾਈਡ) ਦੀ ਚੋਣ ਕਰਦੇ ਹਾਂ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਬਿਹਤਰ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਸੋਖਣ, ਸਰੀਰਕ ਤਾਕਤ ਅਤੇ ਬਿਹਤਰ ਰਸਾਇਣਕ ਅਨੁਕੂਲਤਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।ਇੱਥੇ ਦੋ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾਵਾਂ ਹਨ: immobilon-p (0.45um) ਅਤੇ immobilon PSQ (MW <20kDa ਲਈ 0.2um)।
ਇੱਕ ਅਰਧ ਸੁੱਕਾ ਤਰੀਕਾ
ਯਾਨੀ, ਜੈੱਲ ਇੰਟਰਲੇਅਰ ਮਿਸ਼ਰਨ ਨੂੰ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਬਫਰ ਦੇ ਨਾਲ ਫਿਲਟਰ ਪੇਪਰ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਰੱਖਿਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਪ੍ਰਾਪਤ ਕਰਨ ਲਈ ਕਰੰਟ ਨੂੰ ਫਿਲਟਰ ਪੇਪਰ 'ਤੇ ਸੋਖਦੇ ਹੋਏ ਬਫਰ ਦੁਆਰਾ ਸੰਚਾਲਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।ਕਿਉਂਕਿ ਮੌਜੂਦਾ ਫਿਲਮ ਗਲੂ 'ਤੇ ਸਿੱਧਾ ਕੰਮ ਕਰਦਾ ਹੈ, ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਮੁਕਾਬਲਤਨ ਕਠੋਰ ਹੁੰਦੀਆਂ ਹਨ, ਪਰ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਸਮਾਂ ਛੋਟਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਉੱਚ ਹੁੰਦੀ ਹੈ।
(1) ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੀ ਚੋਣ
ਮੌਜੂਦਾ 1ma-2ma / cm2 ਹੈ, ਅਤੇ ਅਸੀਂ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 100mA / ਝਿੱਲੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਦੇ ਹਾਂ।ਟਰਾਂਸਫਰ ਦਾ ਸਮਾਂ ਟੀਚਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਣੂ ਦੇ ਆਕਾਰ ਅਤੇ ਜੈੱਲ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਚੁਣਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਅਸਲ ਸਥਿਤੀ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਉਚਿਤ ਰੂਪ ਵਿੱਚ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ.
ਟੀਚਾ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਣੂ ਦਾ ਆਕਾਰ (kDa), ਜੈੱਲ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਅਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਸਮਾਂ
80---140 8% 1.5-2.0
25---80 10% 1.5
15—40 12% 0.75
<20 15% 0.5
(2) ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਕਾਰਵਾਈ
(1) ਫਿਲਟਰ ਪੇਪਰ ਅਤੇ ਝਿੱਲੀ ਦੀ ਤਿਆਰੀ (ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰਸਿਸ ਤੋਂ 20 ਮਿੰਟ ਪਹਿਲਾਂ ਤਿਆਰੀ ਸ਼ੁਰੂ ਕੀਤੀ ਜਾਵੇਗੀ)।
A. ਜਾਂਚ ਕਰੋ ਕਿ ਕੀ ਕਾਫ਼ੀ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਬਫਰ ਹਨ, ਜੋ ਤੁਰੰਤ ਤਿਆਰ ਨਹੀਂ ਕੀਤੇ ਗਏ ਹਨ।
B. ਜਾਂਚ ਕਰੋ ਕਿ ਕੀ ਫਿਲਟਰ ਪੇਪਰ ਅਤੇ ਸਹੀ ਆਕਾਰ ਦੀ ਝਿੱਲੀ ਹੈ।
C. ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ ਲਗਭਗ 1-2 ਮਿੰਟ ਲਈ ਮੀਥੇਨੌਲ ਵਿੱਚ ਡੁਬੋ ਦਿਓ।ਅਤੇ ਫਿਰ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਬਫਰ ਵਿੱਚ ਤਬਦੀਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ।
D. ਢੁਕਵੇਂ ਚਿਪਕਣ ਵਾਲੇ ਫਿਲਟਰ ਪੇਪਰ ਅਤੇ ਮੇਮਬ੍ਰੇਨ ਫਿਲਟਰ ਪੇਪਰ ਨੂੰ ਕ੍ਰਮਵਾਰ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਬਫਰ ਵਿੱਚ ਭਿਓ ਦਿਓ।
ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਬਫਰ ਵਿੱਚ ਦਾਖਲ ਹੋਣ ਵੇਲੇ ਪੀਡੀਵੀਐਫ ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ ਮੀਥੇਨੌਲ ਵਿੱਚ ਕਿੰਨਾ ਚਿਰ ਭਿੱਜਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ?
PVDF ਹਾਈਡ੍ਰੋਫੋਬਿਕ ਹੈ, ਅਤੇ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਬਫਰ ਵਿੱਚ ਭਿੱਜਣਾ ਮੁਸ਼ਕਲ ਹੈ।ਮੀਥੇਨੌਲ ਦੇ ਇਲਾਜ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਇਸਨੂੰ ਭਿੱਜਣਾ ਆਸਾਨ ਹੋ ਜਾਂਦਾ ਹੈ।PVDF ਦਾ ਪ੍ਰੀਟਰੀਟਮੈਂਟ ਇਸ ਨੂੰ ਮੀਥੇਨੌਲ ਨਾਲ ਭਿੱਜਣਾ ਅਤੇ ਕਿਰਿਆਸ਼ੀਲ ਕਰਨਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਫਿਰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਭਿੱਜਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਇਸਨੂੰ ਡਿਸਟਿਲ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਦੋ ਵਾਰ ਧੋਣਾ ਹੈ।ਮੀਥੇਨੌਲ ਬੁਲਬਲੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਨ ਦਾ ਉਦੇਸ਼ PVDF ਝਿੱਲੀ 'ਤੇ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਤੌਰ 'ਤੇ ਚਾਰਜ ਕੀਤੇ ਸਮੂਹਾਂ ਨੂੰ ਸਰਗਰਮ ਕਰਨਾ ਅਤੇ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਚਾਰਜ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਨਾਲ ਬੰਨ੍ਹਣਾ ਆਸਾਨ ਬਣਾਉਣਾ ਹੈ।
ਲੋਕ ਇਸਨੂੰ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 5-20 ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਵਰਤਦੇ ਹਨ।ਇਸ ਨੂੰ ਗੂੰਦ ਲੈਣ ਦੇ ਨਾਲ ਹੀ ਭਿੱਜਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਅੰਦਾਜ਼ਾ ਲਗਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਕਿ ਇਸ ਵਿੱਚ ਲਗਭਗ 5 ਮਿੰਟ ਲੱਗਣਗੇ।ਪ੍ਰਭਾਵ ਬੁਰਾ ਨਹੀਂ ਹੈ.ਅਤੀਤ ਵਿੱਚ, ਕੁਝ ਵੈਬਫ੍ਰੈਂਡਜ਼ ਨੇ ਪੋਸਟ ਕੀਤਾ ਸੀ ਕਿ ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ ਸਮਾਂ ਬਹੁਤ ਮਾਇਨੇ ਨਹੀਂ ਰੱਖਦਾ, ਪਰ ਮੁੱਖ ਗੱਲ ਫਿਲਮ ਦੀ ਗੁਣਵੱਤਾ ਸੀ।ਇਹ ਸੱਚ ਹੈ ਕਿ.ਜਿੰਨਾ ਚਿਰ ਝਿੱਲੀ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਭਿੱਜ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਇਹ ਠੀਕ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ.
Hybond ਦਾ PVDF ਨਿਰਧਾਰਨ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਪੜ੍ਹਦਾ ਹੈ: "100% ਮੇਟੈਨੋਲ (10 ਸਕਿੰਟ) ਵਿੱਚ ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ ਪਹਿਲਾਂ ਤੋਂ ਗਿੱਲਾ ਕਰੋ"।ਮੇਰੀ ਸਮਝ ਇਹ ਹੈ ਕਿ ਘੱਟੋ-ਘੱਟ 10 ਸਕਿੰਟਾਂ ਲਈ ਭਿੱਜਣਾ ਠੀਕ ਹੈ।ਅਸਲ ਵਿੱਚ, 10 ਸਕਿੰਟ ਜਾਂ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ ਭਿੱਜਣਾ ਠੀਕ ਹੈ।
(2) ਤਬਾਦਲਾ
A. ਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਯੰਤਰ 'ਤੇ ਹੇਠਲੇ ਫਿਲਟਰ ਪੇਪਰ ਨੂੰ ਰੱਖੋ।ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ ਤਿੰਨ ਪਰਤਾਂ ਵਰਤੀਆਂ ਜਾਂਦੀਆਂ ਹਨ।
B. ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ ਫਿਲਟਰ ਪੇਪਰ 'ਤੇ ਝਿੱਲੀ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਰੱਖੋ, ਇਸ ਵੱਲ ਧਿਆਨ ਦਿਓ ਕਿ ਝਿੱਲੀ ਅਤੇ ਫਿਲਟਰ ਪੇਪਰ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਬੁਲਬੁਲੇ ਨਾ ਹੋਣ, ਅਤੇ ਝਿੱਲੀ ਨੂੰ ਗਿੱਲਾ ਰੱਖਣ ਲਈ ਕੁਝ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਬਫਰ ਨੂੰ ਝਿੱਲੀ 'ਤੇ ਡੋਲ੍ਹ ਦਿਓ।
C. ਗੂੰਦ ਨੂੰ ਛਿੱਲੋ, ਸਟੈਕ ਜੈੱਲ ਨੂੰ ਹਟਾਓ ਅਤੇ ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਇਸਨੂੰ ਫਿਲਮ 'ਤੇ ਲੈ ਜਾਓ।
D. ਫਿਲਮ ਦੇ ਉੱਪਰਲੇ ਖੱਬੇ ਕੋਨੇ ਨੂੰ ਕੱਟੋ ਅਤੇ ਪੈਨਸਿਲ ਨਾਲ ਫਿਲਮ 'ਤੇ ਗੂੰਦ ਦੀ ਸਥਿਤੀ 'ਤੇ ਨਿਸ਼ਾਨ ਲਗਾਓ।
E. ਗੂੰਦ 'ਤੇ ਗੂੰਦ ਦੇ ਵਿਰੁੱਧ ਫਿਲਟਰ ਪੇਪਰ ਦੇ ਇੱਕ ਟੁਕੜੇ ਨੂੰ ਢੱਕੋ।ਕੁਝ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਬਫਰ ਪਾਓ ਅਤੇ ਫਿਲਟਰ ਪੇਪਰ ਦੇ ਦੋ ਟੁਕੜੇ ਰੱਖੋ।
F. ਇਲੈਕਟ੍ਰਿਕ ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਯੰਤਰ ਨੂੰ ਸਥਾਪਿਤ ਕਰੋ ਅਤੇ ਲੋੜਾਂ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਲੋੜੀਂਦਾ ਵਰਤਮਾਨ ਅਤੇ ਸਮਾਂ ਚੁਣੋ।
G. ਟ੍ਰਾਂਸਫਰ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਦੌਰਾਨ, ਵੋਲਟੇਜ ਤਬਦੀਲੀ ਨੂੰ ਕਿਸੇ ਵੀ ਸਮੇਂ ਦੇਖਿਆ ਜਾਵੇਗਾ, ਅਤੇ ਕਿਸੇ ਵੀ ਅਸਧਾਰਨਤਾ ਨੂੰ ਸਮੇਂ ਵਿੱਚ ਐਡਜਸਟ ਕੀਤਾ ਜਾਵੇਗਾ।
ਪੋਸਟ ਟਾਈਮ: ਸਤੰਬਰ-07-2022
