Meriv çawa benîştê veqetandinê bikar tîne?
Veguheztina membrana blota rojavayî
Di bin çalakiya herikê de, proteîn ji gêlê vediguhezîne hilgirê hişk (membran).
Hilbijartina membranê: materyalên ku bi gelemperî di çapkirinê de têne bikar anîn membrana NC, DBM, DDT, membrana naylon, PVDF, hwd. Em PVDF (fluoride polyvinylidene) hildibijêrin, ku xwedan adsorbasyona proteîn, hêza laşî û lihevhatina kîmyewî çêtir e.Du taybetmendî hene: immobilon-p (0.45um) û immobilon PSQ (0.2um ji bo MW <20kDa).
Rêbazek nîv hişk
Ango, kombînasyona navbera gêlê di navbera kaxeza parzûnê ya bi tampona veguheztinê de tê danîn, û herik di nav tampona ku li ser kaxeza parzûnê ve hatî kişandin ve tê rêve kirin da ku bandora veguheztinê bi dest bixe.Ji ber ku niha rasterast li ser zikê fîlimê tevdigere, şert û mercên veguheztinê bi nisbeten dijwar in, lê dema veguheztinê kurt e û karîgerî zêde ye.
(1) hilbijartina şert û mercên ceribandinê
Niha 1ma-2ma / cm2 e, û em bi gelemperî 100mA / membran bikar tînin.Demjimêra veguheztinê dikare li gorî mezinahiya molekula proteîna armanc û berhevoka gêlê were hilbijartin, û li gorî rewşa rastîn bi rêkûpêk were sererast kirin.
Mezinahiya molekulê ya proteîna armanc (kDa), berhevoka gel û dema veguheztinê
80---140 8% 1,5-2,0
25---80 10% 1,5
15-40 12% 0,75
<20 15% 0,5
(2) operasyona ceribandinê
(1) Amadekirina kaxez û parzûna parzûnê (amadekirin divê 20 hûrdem berî elektroforezê were destpêkirin).
A. Kontrol bikin ka têra xwe tamponên veguheztinê hene, yên ku tavilê nehatine amadekirin.
B. Kontrol bikin ka kaxeza parzûnê û parzûna bi mezinahiya rast heye yan na.
C. Perçeyê bi qasî 1-2 deqîqeyan di metanolê de bihelînin.Û paşê veguhestin tamponê veguherîn.
D. Kaxeza parzûna adhesive ya guncav û kaxeza parzûna membranê bi rêzê di nav tampona veguheztinê de bihelînin.
Dema ku têkevin tampona veguheztinê divê membrana PDVF kengî di metanolê de bimîne?
PVDF hîdrofobîk e, û zehmet e ku meriv di tampona veguheztinê de bihele.Piştî tedawiya metanolê, şuştina wê hêsantir e.Pêş-dermankirina PVDF ev e ku meriv wê bi metanolê veşêre û çalak bike, û dûv re piştî ku bi tevahî şuştin wê du caran bi ava distîlkirî bişo.Armanca karanîna gulikên metanol ew e ku komên barkirî yên erênî yên li ser membrana PVDF-ê çalak bikin û girêdana bi proteînên barkirî yên neyînî re hêsantir bikin.
Mirov bi gelemperî 5-20 deqîqeyan bikar tînin.Ew dikare di heman demê de bi girtina benîştê re were şil kirin û tê texmîn kirin ku ew ê bi qasî 5 hûrdeman bigire.Bandor ne xirab e.Di paşerojê de, hin hevalbendên webê şandin ku dema pêvajoyê zêde ne girîng e, lê ya sereke kalîteya fîlimê bû.Ew rast e.Heya ku membran bi tevahî şil bibe, divê baş be.
Taybetmendiya PVDF ya Hybond wiha dixwîne: "Pêşiya membranê di 100% metanol de şil bike (10 çirke)".Têgihîştina min ev e ku baş e ku meriv bi kêmî ve 10 çirkeyan bişon.Bi rastî, baş e ku meriv 10 çirke an 10 hûrdeman bişon.
(2) Veguheztin
A. Kaxeza parzûnê ya jêrîn deynin ser amûra veguheztina elektrîkê.Bi gelemperî sê qat têne bikar anîn.
B. Parzûnê deynin ser kaxeza parzûnê li hember parzûnê, bala xwe bidinê ku di navbera parzûn û kaxeza parzûnê de bilbil çênebin, û hin tampon veguheztinê birijînin ser membranê da ku parzûn şil bimîne.
C. Zencîreyê jêkin, gêlê stûyê jê bikin û bi baldarî bixin ser fîlimê.
D. Goşeyê çepê yê jor ê fîlimê jêkin û bi qelemê li ser fîlimê pozîsyona benîştê nîşan bikin.
E. Cover perçek ji kaxiz Parzûna li dijî benîşt li ser glue.Hin tampon veguheztinê birijînin û du perçe kaxezê parzûnê deynin.
F. Amûra veguheztina elektrîkê saz bikin û li gorî hewcedariyên hewce û dema hewce hilbijêrin.
G. Di pêvajoya veguhastinê de, guhertina voltajê di her kêliyê de were dîtin, û her anormaliyek di demê de were sererast kirin.
Dema şandinê: Sep-07-2022
