Mokhoa oa ho sebelisa glue ea karohano?- Karolo ea 1

Mokhoa oa ho sebelisa glue ea karohano?

Ho fetisoa ha membrane ea Western blot

Tlas'a ketso ea hona joale, protheine e fetisoa ho tloha ho gel ho ea ho sejari se tiileng (membrane).

Khetho ea li-membrane: lisebelisoa tse atisang ho sebelisoa tse tiileng-mohato oa khatiso li kenyelletsa NC membrane, DBM, DDT, membrane ea nylon, PVDF, joalo-joalo Re khetha PVDF (polyvinylidene fluoride), e nang le protheine e ntle ea adsorption, matla a 'mele le ho lumellana hantle ha lik'hemik'hale.Ho na le litlhaloso tse peli: immobilon-p (0.45um) le immobilon PSQ (0.2um bakeng sa MW <20kDa).

Mokhoa oa semi dry

Ka mantsoe a mang, motsoako oa li-gel interlayer o behoa pakeng tsa pampiri ea filthara e nang le "buffer" ea phetisetso, 'me hona joale ho etsoa ka "buffer adsorbed" pampiring ea filthara ho fihlela phello ea phetisetso.Hobane hona joale ho sebetsa ka ho toba sekhomaretsing sa filimi, maemo a ho fetisa a batla a le boima, empa nako ea ho fetisa e khutšoanyane 'me katleho e phahame.

(1) khetho ea maemo a liteko

Hona joale ke 1ma-2ma / cm2, 'me hangata re sebelisa 100mA / membrane.Nako ea phetisetso e ka khethoa ho latela boholo ba molek'hule ea protheine e shebiloeng le mahloriso a gel, 'me e ka fetoloa ka nepo ho latela maemo a nnete.

Sepheo sa boholo ba limolek'hule tsa protheine (kDa), mahloriso a gel le nako ea phetisetso

80---140 8% 1.5-2.0

25---80 10% 1.5

15-40 12% 0,75

<20 15% 0.5

(2) ts'ebetso ea liteko

(1) Ho lokisoa ha pampiri ea filthara le lera (boitokisetso bo tla qala metsotso e 20 pele ho electrophoresis).

K. Hlahloba hore na ho na le li-buffers tse lekaneng tsa phetisetso, tse sa lokisoang hanghang.

B. Sheba hore na ho na le pampiri ea sefe le lera la boholo bo nepahetseng.

C. Kenya lera ka har'a methanol ka metsotso e ka bang 1-2.Ebe e fetisetsoa ho buffer ea phetiso.

D. Kenya pampiri e nepahetseng ea sekhomaretsi le pampiri ea sefa ea membrane ka har'a buffer ea phetiso ka ho latellana.

Lera la PDVF le lokela ho kenella ka nako e kae ka methanol ha le kena ka har'a buffer ea phetisetso?

PVDF e na le hydrophobic, 'me ho thata ho inela ka har'a buffer ea phetisetso.Ka mor'a phekolo ea methanol, ho bonolo ho inela.Tlhokomelo ea pele ea PVDF ke ho e inela le ho e kenya tšebetsong ka methanol, ebe e hlatsoa habeli ka metsi a hloekisitsoeng ka mor'a ho koloba hantle.Sepheo sa ho sebelisa li-bubble tsa methanol ke ho kenya tšebetsong lihlopha tse qosoang hantle ka har'a lera la PVDF le ho etsa hore ho be bonolo ho tlama liprotheine tse qosoang hampe.

Hangata batho ba e sebelisa metsotso e 5-20.E ka kolobisoa ka nako e le 'ngoe le ho nka sekhomaretsi,' me ho hakanngoa hore ho tla nka metsotso e ka bang 5.Phello ha e mpe.Nakong e fetileng, metsoalle e meng ea marang-rang e ile ea ngola hore nako ea ts'ebetso ha e na taba, empa senotlolo e ne e le boleng ba filimi.Ke 'nete.Ha feela lera le kolobile ka ho feletseng, le lokela ho ba hantle.

Tlhaloso ea Hybond's PVDF e baleha tjena: "pele ho metsi lera ka 100% metanol (metsotsoana e 10)".Kutloisiso ea ka ke hore ho lokile ho inela bonyane metsotsoana e 10.Ebile, ho lokile ho inela metsotsoana e 10 kapa metsotso e 10.

(2) Ho fetisoa

A. Beha pampiri e ka tlase ea sefe holim'a sesebelisoa sa ho fetisa motlakase.Ka kakaretso ho sebelisoa mekato e meraro.

B. Beha lera pampiring ea sefe khahlanong le lera, ela hloko hore u se ke ua ba le lipululana pakeng tsa lera le pampiri ea sefe, 'me u tšollele buffer e itseng holim'a lera ho boloka lera le le metsi.

C. Hlakola sekhomaretsi, tlosa gel ea stack mme u e tsamaise ka hloko filiming.

D. Khaola sekhutlo se ka holimo se letšehali sa filimi 'me u tšoaee boemo ba sekhomaretsi filiming ka pentšele.

E. Koahela sekhechana sa pampiri ea sefene khahlano le sekhomaretsi sekhomaretsing.Tšela buffer e 'ngoe ea phetisetso 'me u behe likotoana tse peli tsa pampiri ea sefe.

F. Kenya sesebelisoa sa ho fetisa motlakase ebe u khetha nako e hlokahalang le nako ho latela litlhoko.

G. Nakong ea ts'ebetso ea ho fetisa, phetoho ea motlakase e tla hlokomeloa ka nako leha e le efe, 'me ntho leha e le efe e sa tloaelehang e tla lokisoa ka nako.