Ciamar a chleachdas tu glue dealachaidh?- pàirt 1

Ciamar a chleachdas tu glue dealachaidh?

Gluasad membran blot an iar

Fo ghnìomh an t-sruth, thèid am pròtain a ghluasad bhon gel chun a 'ghiùlan cruaidh (membran).

Taghadh membran: tha na stuthan ìre cruaidh a thathas a’ cleachdadh gu cumanta ann an clò-bhualadh a’ toirt a-steach membran NC, DBM, DDT, membran nylon, PVDF, msaa. Bidh sinn a’ taghadh PVDF (polyvinylidene fluoride), aig a bheil sùghadh pròtain nas fheàrr, neart corporra agus co-chòrdalachd ceimigeach nas fheàrr.Tha dà shònrachadh ann: immobilon-p (0.45um) agus immobilon PSQ (0.2um airson MW <20kDa).

Dòigh leth-thioram

Is e sin, tha an cothlamadh gel interlayer air a chuir eadar am pàipear sìoltachain leis a ’bhufair gluasaid, agus tha an sruth air a stiùireadh tron ​​​​bufair a tha air a shanasachadh air a’ phàipear sìoltachain gus a ’bhuaidh gluasaid a choileanadh.Leis gu bheil an sruth ag obair gu dìreach air glaodh film, tha na suidheachaidhean gluasaid gu math cruaidh, ach tha an ùine gluasaid goirid agus tha an èifeachdas àrd.

(1) taghadh de shuidheachaidhean deuchainneach

Is e an sruth 1ma-2ma / cm2, agus mar as trice bidh sinn a’ cleachdadh 100mA / membran.Faodar an ùine gluasaid a thaghadh a rèir meud moileciuil pròtain targaid agus dùmhlachd gel, agus faodar atharrachadh gu h-iomchaidh a rèir an t-suidheachaidh fhìor.

Targaid meud moileciuil pròtain (kDa), dùmhlachd gel agus ùine gluasaid

80---140 8% 1.5-2.0

25---80 10% 1.5

15—40 12% 0.75

<20 15% 0.5

(2) obrachadh deuchainneach

(1) Ag ullachadh pàipear sìoltachain agus membran (thèid ullachadh a thòiseachadh 20 mionaid ro electrophoresis).

F. Dèan cinnteach a bheil gu leòr bufairean gluasaid ann, nach eil air an ullachadh sa bhad.

B. Dèan cinnteach a bheil pàipear sìoltachain agus membran den mheud cheart.

C. Cuir a-steach an membran ann am methanol airson timcheall air 1-2 mionaid.Agus an uairsin air a ghluasad chun bufair gluasaid.

D. Soak am pàipear sìoltachain adhesive iomchaidh agus pàipear sìoltachain membran a-steach don bhufair gluasaid fa leth.

Dè cho fada ‘s a bu chòir don membran PDVF bogadh ann am methanol nuair a thèid e a-steach don bhufair gluasaid?

Tha PVDF hydrophobic, agus tha e duilich a dhol a-steach don bhufair gluasaid.Às deidh làimhseachadh methanol, tha e nas fhasa a bhith bog.Is e pretreatment PVDF a bhith air a bogadh agus a ghnìomhachadh le methanol, agus an uairsin a nighe dà uair le uisge grùide às deidh a bhith bog gu mionaideach.Is e adhbhar a bhith a’ cleachdadh builgeanan methanol na buidhnean le deagh chasaid a chuir an gnìomh air an membran PVDF agus a dhèanamh nas fhasa ceangal a dhèanamh le pròtanan le droch chasaid.

Mar as trice bidh daoine ga chleachdadh airson 5-20 mionaidean.Faodar a bhith bogach aig an aon àm ri bhith a’ toirt glaodh, agus thathas a’ meas gun toir e timcheall air 5 mionaidean.Chan eil a 'bhuaidh dona.San àm a dh'fhalbh, thuirt cuid de charaidean-lìn nach robh an ùine giollachd gu mòr gu diofar, ach b 'e càileachd an fhilm an rud as cudromaiche.Tha sin fìor.Cho fad ‘s a tha an membran làn bog, bu chòir dha a bhith ceart gu leòr.

Tha sònrachadh PVDF Hybond a’ leughadh mar a leanas: “ro fhliuch an membran ann an 100% metanol (10 diogan)".Is e mo thuigse gu bheil e ceart gu leòr a bhith bog airson co-dhiù 10 diogan.Gu dearbh, tha e ceart gu leòr a bhith bog airson 10 diogan no 10 mionaidean.

(2) Gluasad

A. Cuir am pàipear sìoltachain as ìsle air an inneal gluasaid dealain.Mar as trice bidh trì sreathan air an cleachdadh.

B. Cuir an membran air a’ phàipear sìoltachain an aghaidh an membran, thoir an aire nach bi builgeanan eadar an membran agus am pàipear sìoltachain, agus dòirt bufair gluasaid air an membran gus an membran a chumail fliuch.

C. Thoir air falbh an glaodh, thoir air falbh an gel cruachainn agus gluais gu faiceallach e air an fhilm.

D. Gearr dheth oisean gu h-àrd air an taobh chlì den fhilm agus comharraich suidheachadh glaodh air an fhilm le peansail.

E. Còmhdaich pìos pàipear sìoltachaidh an aghaidh glaodh air a’ ghleus.Thoir beagan bufair gluasaid agus cuir dà phìos de phàipear sìoltachain.

F. Stàlaich an inneal gluasaid dealain agus tagh an t-sruth agus an ùine a tha a dhìth a rèir na feumalachdan.

G. Rè a 'phròiseas gluasaid, bithear a' cumail sùil air an atharrachadh bholtachd aig àm sam bith, agus thèid ana-cainnt sam bith atharrachadh ann an ùine.