ໃຊ້ກາວແຍກຕ່າງຫາກແນວໃດ?
ການໂອນເຍື່ອເມືອກຕາເວັນຕົກ
ພາຍໃຕ້ການປະຕິບັດຂອງປະຈຸບັນ, ທາດໂປຼຕີນຈະຖືກໂອນຈາກ gel ໄປສູ່ຜູ້ຂົນສົ່ງແຂງ (membrane).
ການຄັດເລືອກ Membrane: ວັດສະດຸໄລຍະແຂງທີ່ໃຊ້ທົ່ວໄປໃນການພິມປະກອບມີເຍື່ອ NC, DBM, DDT, ເຍື່ອ nylon, PVDF, ແລະອື່ນໆ. ພວກເຮົາເລືອກ PVDF (polyvinylidene fluoride), ເຊິ່ງມີການດູດຊຶມທາດໂປຼຕີນທີ່ດີກວ່າ, ຄວາມເຂັ້ມແຂງທາງດ້ານຮ່າງກາຍແລະຄວາມເຂົ້າກັນໄດ້ຂອງສານເຄມີທີ່ດີກວ່າ.ມີສອງສະເພາະ: immobilon-p (0.45um) ແລະ immobilon PSQ (0.2um ສໍາລັບ MW < 20kDa).
ວິທີການເຄິ່ງແຫ້ງ
ນັ້ນແມ່ນ, ການປະສົມປະສານຂອງ gel interlayer ແມ່ນຖືກຈັດໃສ່ລະຫວ່າງກະດາດການກັ່ນຕອງກັບ buffer ການໂອນ, ແລະປະຈຸບັນແມ່ນດໍາເນີນການຜ່ານ buffer adsorbed ໃນເຈ້ຍການກັ່ນຕອງເພື່ອບັນລຸຜົນກະທົບການໂອນ.ເນື່ອງຈາກວ່າປະຈຸບັນປະຕິບັດໂດຍກົງກ່ຽວກັບກາວຮູບເງົາ, ເງື່ອນໄຂການໂອນແມ່ນຂ້ອນຂ້າງຮຸນແຮງ, ແຕ່ເວລາການໂອນແມ່ນສັ້ນແລະປະສິດທິພາບສູງ.
(1) ການຄັດເລືອກເງື່ອນໄຂການທົດລອງ
ປະຈຸບັນແມ່ນ 1ma-2ma / cm2, ແລະພວກເຮົາມັກຈະໃຊ້ 100mA / ເຍື່ອ.ເວລາການໂອນສາມາດເລືອກໄດ້ຕາມຂະຫນາດຂອງໂມເລກຸນທາດໂປຼຕີນຈາກເປົ້າຫມາຍແລະຄວາມເຂັ້ມຂົ້ນຂອງເຈນ, ແລະສາມາດປັບຕົວໄດ້ຕາມສະພາບຕົວຈິງ.
ເປົ້າຫມາຍຂະຫນາດໂມເລກຸນທາດໂປຼຕີນ (kDa), ຄວາມເຂັ້ມຂຸ້ນຂອງເຈນແລະເວລາການໂອນ
80---140 8% 1.5-2.0
25---80 10% 1.5
15–40 12% 0.75
<20 15% 0.5
(2) ການປະຕິບັດການທົດລອງ
(1) ການກະກຽມກະດາດກັ່ນຕອງແລະເຍື່ອ (ການກະກຽມຈະເລີ່ມຕົ້ນ 20 ນາທີກ່ອນ electrophoresis).
A. ກວດເບິ່ງວ່າມີ buffers ການໂອນພຽງພໍ, ເຊິ່ງບໍ່ໄດ້ກະກຽມທັນທີ.
B. ກວດເບິ່ງວ່າມີເຈ້ຍການກັ່ນຕອງແລະເຍື່ອຂອງຂະຫນາດທີ່ເຫມາະສົມ.
C. ເອົາເຍື່ອເຂົ້າໄປໃນ methanol ປະມານ 1-2 ນາທີ.ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນໄດ້ຍົກຍ້າຍກັບ buffer ການໂອນ.
D. ແຊ່ກະດາດກອງກາວທີ່ເຫມາະສົມແລະກະດາດການກັ່ນຕອງເຍື່ອໃສ່ໃນ buffer ການຍົກຍ້າຍຕາມລໍາດັບ.
ເຍື່ອ PDVF ຄວນແຊ່ໃນ methanol ດົນປານໃດເມື່ອເຂົ້າໄປໃນ buffer ການໂອນ?
PVDF ແມ່ນ hydrophobic, ແລະມັນເປັນການຍາກທີ່ຈະແຊ່ນ້ໍາໃນ buffer ການໂອນ.ຫຼັງຈາກການປິ່ນປົວດ້ວຍ methanol, ມັນງ່າຍຕໍ່ການແຊ່ນ້ໍາ.ການປິ່ນປົວຂອງ PVDF ແມ່ນການແຊ່ນ້ໍາແລະກະຕຸ້ນມັນດ້ວຍ methanol, ແລະຫຼັງຈາກນັ້ນລ້າງມັນສອງຄັ້ງດ້ວຍນ້ໍາກັ່ນຫຼັງຈາກແຊ່ນ້ໍາຢ່າງລະອຽດ.ຈຸດປະສົງຂອງການນໍາໃຊ້ຟອງ methanol ແມ່ນເພື່ອກະຕຸ້ນກຸ່ມທີ່ມີຄ່າບວກຢູ່ໃນເຍື່ອ PVDF ແລະເຮັດໃຫ້ມັນງ່າຍຕໍ່ການຜູກມັດກັບທາດໂປຼຕີນທີ່ມີຄ່າທາງລົບ.
ຄົນທົ່ວໄປໃຊ້ມັນສໍາລັບ 5-20 ນາທີ.ມັນສາມາດແຊ່ນ້ໍາໄດ້ໃນເວລາດຽວກັນກັບການເອົາກາວ, ແລະຄາດວ່າຈະໃຊ້ເວລາປະມານ 5 ນາທີ.ຜົນກະທົບບໍ່ແມ່ນບໍ່ດີ.ທີ່ຜ່ານມາ, ແຟນເວັບບາງຄົນໄດ້ໂພດວ່າເວລາປະມວນຜົນບໍ່ສໍາຄັນຫຼາຍ, ແຕ່ທີ່ສໍາຄັນແມ່ນຄຸນນະພາບຂອງຮູບເງົາ.ນັ້ນແມ່ນຄວາມຈິງ.ຕາບໃດທີ່ເຍື່ອໄດ້ຖືກແຊ່ນ້ໍາຫມົດ, ມັນຄວນຈະດີ.
ຂໍ້ມູນຈໍາເພາະຂອງ PVDF ຂອງ Hybond ອ່ານດັ່ງນີ້: "pret the membrane ໃນ 100% metanol (10 ວິນາທີ)".ຄວາມເຂົ້າໃຈຂອງຂ້ອຍແມ່ນວ່າມັນບໍ່ເປັນຫຍັງທີ່ຈະແຊ່ນ້ໍາຢ່າງຫນ້ອຍ 10 ວິນາທີ.ໃນຄວາມເປັນຈິງ, ມັນເຫມາະສົມທີ່ຈະແຊ່ນ້ໍາສໍາລັບ 10 ວິນາທີຫຼື 10 ນາທີ.
(2) ໂອນ
A. ວາງເຈ້ຍການກັ່ນຕອງຕ່ໍາໃສ່ອຸປະກອນການຖ່າຍທອດໄຟຟ້າ.ໂດຍທົ່ວໄປແລ້ວສາມຊັ້ນແມ່ນໃຊ້.
B. ວາງເຍື່ອໃສ່ກະດາດກອງໃສ່ກັບເຍື່ອ, ເອົາໃຈໃສ່ບໍ່ໃຫ້ມີຟອງລະຫວ່າງເຍື່ອແລະກະດາດການກັ່ນຕອງ, ແລະຖອກບາງແຜ່ນໃສ່ແຜ່ນເພື່ອບໍ່ໃຫ້ເຍື່ອປຽກ.
C. ປອກເປືອກກາວອອກ, ເອົາ stack gel ອອກແລະລະມັດລະວັງຍ້າຍມັນໃສ່ຮູບເງົາໄດ້.
D. ຕັດແຈເບື້ອງຊ້າຍດ້ານເທິງຂອງຮູບເງົາແລະຫມາຍຕໍາແຫນ່ງກາວໃສ່ຮູບເງົາດ້ວຍ pencil.
E. ກວມເອົາສິ້ນຂອງເຈ້ຍການກັ່ນຕອງຕ້ານກັບກາວໃສ່ກາວ.ຖອກໃສ່ບາງຕົວເກັບກ່ຽວ ແລະວາງສອງຕ່ອນຂອງເຈ້ຍກອງ.
F. ຕິດຕັ້ງເຄື່ອງມືການຖ່າຍທອດໄຟຟ້າແລະເລືອກປະຈຸບັນແລະເວລາທີ່ກໍານົດໄວ້ຕາມຄວາມຕ້ອງການ.
G. ໃນລະຫວ່າງການຂະບວນການໂອນ, ການປ່ຽນແປງແຮງດັນຈະຖືກສັງເກດເຫັນໃນເວລາໃດກໍ່ຕາມ, ແລະຄວາມຜິດປົກກະຕິໃດໆຈະຖືກປັບຕາມເວລາ.
ເວລາປະກາດ: ກັນຍາ-07-2022
