د جلا کولو ګولۍ څنګه وکاروئ؟– لومړۍ برخه

د جلا کولو ګولۍ څنګه وکاروئ؟

د غربي بلاټ جھلی لیږد

د اوسني عمل لاندې، پروټین د جیل څخه جامد کیریر (جبل) ته لیږدول کیږي.

د غشا انتخاب: په عام ډول په نقاشۍ کې کارول شوي جامد مرحلې مواد شامل دي NC جھلی، DBM، DDT، نایلان جھلی، PVDF، او نور. موږ PVDF (پولی وینیلایډین فلورایډ) غوره کوو، کوم چې د پروټین ښه جذب، فزیکي ځواک او ښه کیمیاوي مطابقت لري.دوه مشخصات شتون لري: immobilon-p (0.45um) او immobilon PSQ (0.2um د MW <20kDa لپاره).

نیمه وچه طریقه

دا دی ، د جیل انټر لیر ترکیب د لیږد بفر سره د فلټر کاغذ ترمینځ ځای په ځای شوی ، او اوسنی د لیږد اغیز ترلاسه کولو لپاره په فلټر کاغذ کې جذب شوي بفر له لارې ترسره کیږي.ځکه چې اوسني په مستقیم ډول د فلم ګلو باندې عمل کوي، د لیږد شرایط نسبتا سخت دي، مګر د لیږد وخت لنډ دی او موثریت لوړ دی.

(1) د تجربوي شرایطو انتخاب

اوسنی 1ma-2ma / cm2 دی، او موږ معمولا 100mA / جھلی کاروو.د لیږد وخت د هدف پروټین مالیکول اندازې او جیل غلظت سره سم ټاکل کیدی شي ، او د اصلي وضعیت سره سم په مناسب ډول تنظیم کیدی شي.

د پروټین مالیکولر اندازه (kDa) ، د جیل غلظت او د لیږد وخت په نښه کړئ

80---140 8% 1.5-2.0

25---80 10% 1.5

15-40 12% 0.75

<20 15% 0.5

(2) تجربوي عملیات

(1) د فلټر کاغذ او جھلی چمتو کول (تیاری باید د الکتروفورسیس څخه 20 دقیقې مخکې پیل شي).

A. وګورئ چې ایا د لیږد کافي بفرونه شتون لري، کوم چې سمدستي چمتو شوي ندي.

ب) وګورئ چې ایا د فلټر کاغذ او د مناسبې اندازې جھلی شتون لري.

ج) غشا د 1-2 دقیقو لپاره په میتانول کې ډوب کړئ.او بیا د لیږد بفر ته لیږدول کیږي.

D. مناسب چپکونکي فلټر کاغذ او د جھلی فلټر کاغذ په ترتیب سره د لیږد بفر کې ډوب کړئ.

د لیږد بفر ته د ننوتلو پرمهال باید د PDVF جھلی څومره وخت په میتانول کې ډوب شي؟

PVDF هایدروفوبیک دی، او د لیږد بفر کې ډوب کول ستونزمن دي.د میتانول درملنې وروسته ، لندبل کول اسانه دي.د PVDF دمخه درملنه دا ده چې دا په میتانول سره لمده او فعاله کړئ ، او بیا یې په ښه توګه لندبل کولو وروسته دوه ځله د منحل اوبو سره مینځل.د میتانول بلبلونو کارولو هدف د PVDF جھلی کې مثبت چارج شوي ګروپونه فعالول او د منفي چارج شوي پروټینونو سره تړل اسانه کول دي.

خلک معمولا دا د 5-20 دقیقو لپاره کاروي.دا په عین وخت کې د ګولیو اخیستلو په وخت کې لندبل کیدی شي، او اټکل کیږي چې دا به شاوخوا 5 دقیقې وخت ونیسي.اغیزه بده نه ده.په تیرو وختونو کې، ځینې ویب ملګري لیکلي چې د پروسس کولو وخت ډیر مهم نه و، مګر کلیدي د فلم کیفیت و.دا ریښتیا ده.تر هغه وخته پورې چې جھلی په بشپړه توګه لوند وي، دا باید سم وي.

د هایبونډ PVDF مشخصات په لاندې ډول لوستل کیږي: "په 100٪ میتانول (10 ثانیو) کې جھلی پری لوند کړئ".زما پوهه دا ده چې دا سمه ده چې لږترلږه د 10 ثانیو لپاره ډوب کړئ.په حقیقت کې، دا سمه ده چې د 10 ثانیو یا 10 دقیقو لپاره ډوب کړئ.

(2) لیږد

A. د برق د لیږد په وسیله د فلټر ټیټ کاغذ کیږدئ.عموما درې پرتونه کارول کیږي.

B. جھلی د فلټر کاغذ پر وړاندې د جھلی په مقابل کې کېږدئ، پام وکړئ چې د جھلی او فلټر کاغذ ترمنځ بلبلونه شتون ونلري، او یو څه لیږد بفر په جھلی کې واچوئ ترڅو جھلی لوند وساتي.

C. د ګوتو څخه پاک کړئ، د سټیک جیل لیرې کړئ او په احتیاط سره یې په فلم کې حرکت وکړئ.

D. د فلم پورتنۍ کیڼ کونج پرې کړئ او د پنسل سره په فلم کې د ګلو موقعیت په نښه کړئ.

E. د فلټر کاغذ یوه ټوټه د ګوتو په مقابل کې پوښ کړئ.یو څه د لیږد بفر واچوئ او د فلټر کاغذ دوه ټوټې کېږدئ.

F. د بریښنا لیږد وسیله نصب کړئ او د اړتیا سره سم د اړتیا وړ اوسني او وخت وټاکئ.

G. د لیږد پروسې په جریان کې، د ولتاژ بدلون باید هر وخت ولیدل شي، او هر ډول غیر معمولي حالت باید په وخت سره تنظیم شي.