ခွဲခွာကော်ကို ဘယ်လိုသုံးမလဲ။
အနောက်တိုင်း blot အမြှေးပါးလွှဲပြောင်း
လျှပ်စီးကြောင်း၏လုပ်ဆောင်ချက်အောက်တွင်၊ ပရိုတင်းကို gel မှအစိုင်အခဲသယ်ဆောင်သူ (အမြှေးပါး) သို့လွှဲပြောင်းသည်။
Membrane ရွေးချယ်ခြင်း- ပုံနှိပ်ခြင်းတွင် အသုံးများသော အစိုင်အခဲအဆင့် ပစ္စည်းများ NC အမြှေးပါး၊ DBM၊ DDT၊ နိုင်လွန်မြှေးပါး၊ PVDF စသည်တို့ ပါဝင်သည်။ ကျွန်ုပ်တို့သည် ပရိုတင်းစုပ်ယူမှု၊ ရုပ်ပိုင်းဆိုင်ရာ ခွန်အားနှင့် ဓာတုဗေဒဆိုင်ရာ ပိုမိုကောင်းမွန်သော PVDF (polyvinylidene ဖလိုရိုက်) ကို ရွေးချယ်ပါသည်။သတ်မှတ်ချက်နှစ်ခုရှိသည်- immobilon-p (0.45um) နှင့် immobilon PSQ (0.2um for MW < 20kDa)။
Semi-dry နည်းလမ်း
ဆိုလိုသည်မှာ၊ လွှဲပြောင်းမှုကြားခံနှင့် filter စာရွက်ကြားတွင် gel interlayer ပေါင်းစပ်မှုကို filter စက္ကူပေါ်ရှိကြားခံစုပ်ယူထားသည့်ကြားခံမှတဆင့်စီးဆင်းသွားပါသည်။လက်ရှိ ဖလင်ကော်တွင် တိုက်ရိုက်လုပ်ဆောင်သောကြောင့် လွှဲပြောင်းမှုအခြေအနေများသည် အတော်လေးကြမ်းတမ်းသော်လည်း လွှဲပြောင်းချိန်တိုတောင်းပြီး ထိရောက်မှုလည်း မြင့်မားသည်။
(၁) စမ်းသပ်မှုအခြေအနေများကို ရွေးချယ်ခြင်း။
လက်ရှိသည် 1ma-2ma/cm2 ဖြစ်ပြီး ကျွန်ုပ်တို့ အများအားဖြင့် 100mA/အမြှေးပါးကို အသုံးပြုပါသည်။လွှဲပြောင်းချိန်ကို ပစ်မှတ်ပရိုတင်းမော်လီကျူး၏ အရွယ်အစားနှင့် ဂျယ်အာရုံစူးစိုက်မှု အရွယ်အစားအလိုက် ရွေးချယ်နိုင်ပြီး ပကတိအခြေအနေအရ သင့်လျော်စွာ ချိန်ညှိနိုင်သည်။
ပစ်မှတ်ပရိုတိန်းမော်လီကျူးအရွယ်အစား (kDa)၊ ဂျယ်အာရုံစူးစိုက်မှုနှင့်လွှဲပြောင်းအချိန်
80---140 8% 1.5-2.0
25---80 10% ၁.၅
15–40 12% 0.75
< 20 15% 0.5
(၂) စမ်းသပ်ဆောင်ရွက်မှု
(၁) ဇကာစက္ကူနှင့် အမြှေးပါးများကို ပြင်ဆင်ခြင်း ( electrophoresis မတိုင်မီ မိနစ် 20 တွင် စတင်ပြင်ဆင်ရမည်)။
A. ချက်ချင်းမပြင်ဆင်ရသေးသည့် လွှဲပြောင်းမှုကြားခံများ လုံလောက်မှုရှိမရှိ စစ်ဆေးပါ။
B. သင့်လျော်သောအရွယ်အစားရှိ စစ်ထုတ်စက္ကူနှင့် အမြှေးပါးရှိမရှိ စစ်ဆေးပါ။
C. အမြှေးပါးကို methanol တွင် ၁-၂ မိနစ်ခန့် နှစ်မြှုပ်ထားပါ။ပြီးနောက် လွှဲပြောင်းမှု ကြားခံသို့ လွှဲပြောင်းပါ။
D. သင့်လျော်သော ကော်ဇကာစက္ကူနှင့် အမြှေးပါးဇကာစက္ကူကို လွှဲပြောင်းကြားခံထဲသို့ အသီးသီးစိမ်ပါ။
လွှဲပြောင်းမှုကြားခံသို့ဝင်ရောက်သောအခါ PDVF အမြှေးပါးသည် မီသနောတွင် မည်မျှကြာကြာစိမ်သင့်သနည်း။
PVDF သည် hydrophobic ဖြစ်ပြီး transfer buffer တွင် စိမ်ရန် ခက်ခဲသည်။မီသနော ကုသမှုခံယူပြီးပါက စိမ်ရန်ပိုမိုလွယ်ကူသည်။PVDF ၏ ပြုပြင်ထိန်းသိမ်းမှုမှာ မီသနောဖြင့် စိမ်ပြီး အသက်သွင်းရန် နှင့် သေချာစွာ စိမ်ပြီးနောက် ပေါင်းခံရေဖြင့် နှစ်ကြိမ် ဆေးကြောရန် ဖြစ်ပါသည်။မီသနောပူဖောင်းများကို အသုံးပြုရခြင်း၏ ရည်ရွယ်ချက်မှာ PVDF အမြှေးပါးပေါ်ရှိ အပြုသဘောဆောင်သော အားသွင်းအုပ်စုများကို အသက်သွင်းရန်နှင့် အနုတ်လက္ခဏာရှိသော ပရိုတင်းများနှင့် ပေါင်းစည်းရန် ပိုမိုလွယ်ကူစေရန် ဖြစ်သည်။
များသောအားဖြင့် လူတွေက 5-20 မိနစ်လောက်သုံးတယ်။ကော်ယူပြီး တချိန်တည်း စိမ်ထားနိုင်ပြီး ၅ မိနစ်ခန့် ကြာမည်ဟု ခန့်မှန်းရသည်။အကျိုးသက်ရောက်မှုက မဆိုးပါဘူး။အရင်တုန်းကတော့ အချို့သော webfriend တွေက processing time က သိပ်အရေးမကြီးဘူးလို့ ရေးခဲ့ကြပေမယ့် အဓိကကတော့ ရုပ်ရှင်အရည်အသွေးပါပဲ။မှန်ပါတယ်။အမြှေးပါးကို လုံးလုံးစိမ်ထားသရွေ့ OK ဖြစ်သင့်သည်။
Hybond ၏ PVDF သတ်မှတ်ချက်တွင် အောက်ပါအတိုင်းဖတ်ရသည်- "အမြှေးပါးကို 100% မက်သနော (10 စက္ကန့်) တွင် အစိုစွတ်ထားပါ။"ငါနားလည်တာက အနည်းဆုံး 10 စက္ကန့်လောက် စိမ်ထားလို့ အဆင်ပြေတယ်။တကယ်တော့ 10 စက္ကန့် ဒါမှမဟုတ် 10 မိနစ်လောက် စိမ်ထားလို့ အဆင်ပြေပါတယ်။
(၂) အပြောင်းအရွှေ့
A. အောက်ပိုင်းဇကာစာရွက်ကို လျှပ်စစ်လွှဲပြောင်းကိရိယာပေါ်တွင် တင်ပါ။ယေဘုယျအားဖြင့် အလွှာသုံးလွှာကို အသုံးပြုသည်။
B. အမြှေးပါးကို စစ်ထုတ်စက္ကူပေါ်တွင် အမြှေးပါးနှင့် ကပ်၍ အမြှေးပါးနှင့် စစ်ထုတ်စက္ကူကြားတွင် ပူဖောင်းများမဖြစ်အောင် ဂရုပြုကာ အမြှေးပါးကို စိုစွတ်နေစေရန် အမြှေးပါးပေါ်သို့ ကူးပြောင်းမှုကြားခံအချို့ကို လောင်းချပါ။
ဂ။ ကော်ကို အခွံခွာပြီး stack gel ကိုဖယ်ပြီး ဖလင်ပေါ်ကို သေချာရွှေ့ပါ။
ဃ။ ဖလင်၏ ဘယ်ဘက်အပေါ်ထောင့်ကို ဖြတ်၍ ဖလင်ပေါ်တွင် ကော်အနေအထားကို ခဲတံဖြင့် အမှတ်အသားပြုပါ။
(င) ကော်ပေါ်ရှိ ကော်ကို ဇကာစာရွက်တစ်ရွက်ကို ဖုံးအုပ်ပါ။အပြောင်းအရွှေ့ကြားခံအချို့ကို လောင်းချပြီး ဇကာစာရွက်နှစ်ပိုင်းကို တင်ပါ။
F. လျှပ်စစ်လွှဲပြောင်းကိရိယာကို တပ်ဆင်ပြီး လိုအပ်ချက်အရ လိုအပ်သော လက်ရှိနှင့် အချိန်ကို ရွေးချယ်ပါ။
G. လွှဲပြောင်းခြင်းလုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း၊ ဗို့အားပြောင်းလဲမှုကို အချိန်မရွေးတွေ့ရှိနိုင်ပြီး ပုံမှန်မဟုတ်သည့်အရာများကို အချိန်နှင့်တပြေးညီ ချိန်ညှိရမည်ဖြစ်သည်။
စာတိုက်အချိန်- စက်တင်ဘာ- ၀၇-၂၀၂၂
